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中高齢期から始まるタンパク質品質管理システムの破綻に関する研究

从中老年开始的蛋白质质量控制系统崩溃的研究

基本信息

批准号：
21K11710
负责人：
高橋良哉
金额：
$ 1.75万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

タンパク質品質管理システムの異常は、タンパク質の異常化体の蓄積をもたらし、多くの細胞機能を急速に悪化させる要因のひとつである。本研究はタンパク質品質管理システムに関わるプロテアソーム自身の加齢に伴う異常の原因を明らかにすることを目的としている。本年度は、研究実施計画の（研究１）の「加齢に伴うC2サブユニットの変化」を若齢、中齢および老齢のラット肝臓を用いて調べた。等電点イムノブロット解析の結果、C2サブユニットの等電点は若齢から中齢期までは変化しないが、老齢期では複数の等電点の異なるものが現れることを明らかにした。しかし、N3、C7、C9サブユニットには加齢変化が認められなかった。次に、老齢ラット肝臓のプロテアソームC2サブユニットの翻訳後修飾（研究2）とプロテアソームの安定性（研究3）を調べるためには精製したプロテアソームが必要である。そこで昨年、ウサギに免疫して作成したC2サブユニットポリクローナル抗体を血清から精製し、C2抗体カラムを作成した。この抗体カラムを使用し、次年度は、加齢で現れる翻訳後修飾の解析を進めることにする。なお、解析ターゲットは、これまでの解析結果に基づき、C2サブユニットとし、質量分析による翻訳後修飾プロファイリング解析を進めるのと並行して、既知の異常翻訳修飾体（カルボニル化、AGE化、NO化、Met残基やCys残基の酸化など）の解析を特異的化学反応や特異抗体により解析する。さらに、老若ラット肝臓由来の精製プロテアソームに対するプロテアーゼに対する感受性や熱力学的な安定性を調べ、加齢に伴う異常プロテアソーム蓄積の原因に迫る。

Quality control system abnormalities, accumulation of quality abnormalities, rapid change of cellular functions This study aims to clarify the causes of quality problems associated with quality management systems. This year, the research implementation plan (Study 1) of the "increase in the number of C2 users," such as the number of users, the number of users, and the number of users. The isoelectric point of C2 is different from the isoelectric point of C2 in the middle stage and the isoelectric point of C2 in the old stage. N3, C7, C9 The second, the third, the fourth, the In the past, it has been prepared for C2 antibody purification and C2 antibody purification. This antibody is used in the following year, and the analysis of the post-conversion modification is carried out. The analysis results of the above analysis are based on the analysis results of base and C2 residues, the analysis of post-inversion modifications in mass analysis, and the analysis of specific chemical reactions and specific antibodies based on the analysis results of known abnormal inversion modifications (including the analysis results of base and C2 residues, the analysis results of NO2 residues, and the analysis results of Met residues and Cys residues). In addition, if the origin of the liver is refined, the sensitivity and thermodynamic stability of the liver are adjusted, and the reasons for the accumulation of abnormal liver are increased.