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糖部修飾型人工核酸アプタマー創出に向けた基盤技術の構築

糖基修饰人工核酸适体构建基础技术的建立

基本信息

批准号：
19K15702
负责人：
星野秀和
金额：
$ 2万
依托单位：
National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-11-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K15702/
关键词：
人工核酸核酸アプタマーアプタマー改変ポリメラーゼ

项目摘要

特定の標的分子に対して特異的に結合することのできる核酸アプタマーは分子標的薬として期待されている。しかし、天然のDNAやRNAで構成される核酸アプタマーは生体内で核酸分解酵素によって容易に分解されてしまう。そこで、核酸分解酵素耐性を有する人工核酸を用いることで、生体内でも安定的な効果を示すアプタマーを開発することができる。さらに、人工核酸の種類によって細胞膜透過性など様々な特性を付与することができるため、核酸アプタマーに適用可能な人工核酸の種類を拡張することは重要な課題である。核酸アプタマーの取得方法であるSELEX法では、核酸伸長酵素であるポリメラーゼによる転写・逆転写反応が必須であるが、通常のポリメラーゼでは人工核酸に対応できない。そのため人工核酸に対応可能な改変ポリメラーゼが必要である。これまでに研究代表者は架橋型人工核酸である2′,4′-BNA/LNAを含むアプタマーを取得するために100種類以上の独自の改変ポリメラーゼを作製し、実際に人工核酸アプタマーの取得に成功している。そこで本研究では、改変ポリメラーゼを用いることで、人工核酸アプタマーに用いることのできる人工核酸の種類の拡張を目指した。しかし、2′,4′-BNA/LNAよりも嵩高い種類の人工核酸の中には、これまでに開発してきた改変ポリメラーゼでは転写・逆転写反応の効率が不十分なものが見つかった。そこで、当該年度では新規改変ポリメラーゼの開発を実施した。その結果、非常に嵩高い人工核酸についても転写反応が可能な改変ポリメラーゼ、逆転写反応が可能な改変ポリメラーゼをそれぞれ開発することに成功した。嵩高い架橋型人工核酸は核酸分解酵素耐性が非常に高いため、より高性能な人工核酸を用いてSELEXを行うことが可能になった。

The molecular target of the specific target is the binding target of the specific target nucleic acid. Nucleic acid, which is composed of natural DNA and RNA, is easily decomposed by nucleic acid-degrading enzymes in the body.そこで、Nucleic acid decomposing enzyme resistance を有するArtificial nucleic acid を用いることで、生The effect of stabilizing the body is shown in the figure. Types of artificial nucleic acids, cell membrane permeability, and propertiesため、Nucleic acid アプタマーにTypes of artificial nucleic acids that may be applicable を拡张することはImportant issuesである. Nucleic acid extraction method: SELEX method, nucleic acid elongation enzyme: Nucleic acid elongation enzymeよる転WRITING・INVERT転WRITING 远がmustであるが, usually のポリメラーゼでは artificial nucleic acid に対応できない. It is possible to use artificial nucleic acid and it is necessary to change the artificial nucleic acid. The representative of research on the research of これまでに bridge type artificial nucleic acid である2′,4′-BNA/LNA をcontaining むアプタマーをobtained するたWe have successfully produced more than 100 types of artificial nucleic acid artificial nucleic acids.そこでThis research では, modified ポリメラーゼを use いることで, artificial nucleic acid アプタマーに用いることのできるkinds of artificial nucleic acids の拡 Zhang を Eyes refers to した.しかし、2′,4′-BNA/LNA よりも婩高いkind of artificial nucleic acid の中には、これまでにOpen the 発してきたchange the 変ポリメラーゼでは転・ inversely write the reverse 応のefficiency なものが见つかった.そこで、When the new regulations of the year are changed, the new regulations will be implemented.そのRESULTS, VERY に婩高いArtificial nucleic acid についても転WRITE REPUTATION がpossibleなchange変ポリメラーゼ, inverse 転write 远がpossibleなchange変ポリメラーゼをそれぞれ开発することにsuccessした. The high-performance bridge-type artificial nucleic acid and nucleic acid-degrading enzyme resistance are very high, and the high-performance artificial nucleic acid is made of SELEX, which is possible.