抗体レパトア解析を用いた新たなワクチン有効性評価手法の開発

本研究は「経鼻不活化インフルエンザワクチンと注射型インフルエンザワクチンの2種類のワクチンの接種により誘導された抗体集団が異なる」という作業仮説に基づき、抗体機能および抗体遺伝子の両面からのアプローチにより、経鼻ワクチンおよび注射型ワクチンにより誘導された抗体集団（レパトア）を明らかにすることを目標としている。前年度までは、経鼻不活化インフルエンザワクチンおよび注射型不活化インフルエンザワクチンの接種者由来形質芽細胞から抽出した抗体遺伝子をもとに作製したモノクローナルIgG抗体のうち、インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（HA）に結合活性を示す抗体クローンを中心に解析を行ったが、本年度はノイラミニダーゼ（NA）への結合活性がELISAにより認められた抗体クローンのより詳細な解析を行った。まず、昆虫細胞系を用いた組み換えNAタンパク質の作製系を習得し、各抗体クローン間でのNAへの結合活性を比較した。その後、各抗体クローンのノイラミニダーゼ阻害（NI）活性を測定し、抗ウイルス活性の特徴により、抗NA抗体のグループ分けを行った。今後は、グループ分けを行った抗体クローンについて、その活性の違いを生み出す遺伝子的特徴や構造的特徴についてより詳細に検証していく予定である。また、今後実施予定のワクチン接種者の遺伝子レベルおよびタンパクレベルでの抗体レパトア解析に向け、次世代シークエンサーを用いた抗体遺伝子の網羅的解析方法および質量分析器の使用方法についてオンライン講習や専門家とのディスカッションを通じて理解を深め、実験計画を立てた。

本研究は「経鼻不活化インフルエンザワクチンと注射型インフルエンザワクチンの2種類のワクチンの接種により誘導された抗体集団が異なる」という作業仮説に基づき、抗体機能および抗体遺伝子の両面からのアプローチにより、経鼻ワクチンおよび注射型ワクチンにより誘導された抗体集団（レパトア）を明らかにすることを目標としている。前年度までは、経鼻不活化インフルエンザワクチンおよび注射型不活化インフルエンザワクチンの接種者由来形質芽細胞から抽出した抗体遺伝子をもとに作製したモノクローナルIgG抗体のうち、インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（HA）に結合活性を示す抗体クローンを中心に解析を行ったが、本年度はノイラミニダーゼ（NA）への結合活性がELISAにより認められた抗体クローンのより詳細な解析を行った。まず、昆虫細胞系を用いた組み換えNAタンパク質の作製系を習得し、各抗体クローン間でのNAへの結合活性を比較した。その後、各抗体クローンのノイラミニダーゼ阻害（NI）活性を測定し、抗ウイルス活性の特徴により、抗NA抗体のグループ分けを行った。今後は、グループ分けを行った抗体クローンについて、その活性の違いを生み出す遺伝子的特徴や構造的特徴についてより詳細に検証していく予定である。また、今後実施予定のワクチン接種者の遺伝子レベルおよびタンパクレベルでの抗体レパトア解析に向け、次世代シークエンサーを用いた抗体遺伝子の網羅的解析方法および質量分析器の使用方法についてオンライン講習や専門家とのディスカッションを通じて理解を深め、実験計画を立てた。