Studies on the mechanisms of ascidian fertilization

＜ライシンについて＞マボヤでは卵黄膜のHrVC70が精子酵素によって細胞外でユビキチン化され精子プロテアソームによって分解されることを報告している。そこで、カタユウレイボヤ精子を用いて、精子膜表面や精子滲出液のプロテオーム解析を行ったが、プロテアソームサブユニットは検出されていない。一方、精子細胞表面にアスタシン様金属プロテアーゼ（Tast）が豊富に存在することがプロテオーム解析により判明した。Tast阻害剤GM6001は正常卵の受精を強く阻害するが卵膜除去卵の受精を阻害しないこと、卵膜を精子で処理すると、卵膜成分の分解が見られ、それがGM6001によって阻害されることから、Tastが直接または間接的にライシンとして機能していることが考えられる。一方、マボヤにおいてもGM6001とその誘導体は、マボヤ正常卵の受精も阻害し、卵膜除去卵の受精は阻害しないことから、精子の卵膜通過にTastが関わることが示された。さらにその標的は、マボヤ卵黄膜成分ヴィテロジェニンであることが示唆された。今回、マボヤの受精におよぼす脱ユビキチン化酵素阻害剤の影響も検討したところ、それらは受精を強く阻害することが初めて示された。ユビキチン化されたVC70を分解する際に脱ユビキチン化酵素も機能していると考えられる。＜自家不和合性について＞カタユウレイボヤにおけるs-Themisとv-Themisの相互作用の解明を目指して、s-Themisの遺伝子発現条件を検討している。最近、予備実験ながら、s-Themis断片組換え体の効率的発現に成功したので、今後の解析の突破口としたい。

＜ライシンについて＞マボヤでは卵黄膜のHrVC70が精子酵素によって細胞外でユビキチン化され精子プロテアソームによって分解されることを報告している。そこで、カタユウレイボヤ精子を用いて、精子膜表面や精子滲出液のプロテオーム解析を行ったが、プロテアソームサブユニットは検出されていない。一方、精子細胞表面にアスタシン様金属プロテアーゼ（Tast）が豊富に存在することがプロテオーム解析により判明した。Tast阻害剤GM6001は正常卵の受精を強く阻害するが卵膜除去卵の受精を阻害しないこと、卵膜を精子で処理すると、卵膜成分の分解が見られ、それがGM6001によって阻害されることから、Tastが直接または間接的にライシンとして機能していることが考えられる。一方、マボヤにおいてもGM6001とその誘導体は、マボヤ正常卵の受精も阻害し、卵膜除去卵の受精は阻害しないことから、精子の卵膜通過にTastが関わることが示された。さらにその標的は、マボヤ卵黄膜成分ヴィテロジェニンであることが示唆された。今回、マボヤの受精におよぼす脱ユビキチン化酵素阻害剤の影響も検討したところ、それらは受精を強く阻害することが初めて示された。ユビキチン化されたVC70を分解する際に脱ユビキチン化酵素も機能していると考えられる。＜自家不和合性について＞カタユウレイボヤにおけるs-Themisとv-Themisの相互作用の解明を目指して、s-Themisの遺伝子発現条件を検討している。最近、予備実験ながら、s-Themis断片組換え体の効率的発現に成功したので、今後の解析の突破口としたい。