Investigation of a novel amylodotic biomarker for alzheimer disease

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アルツハイマー病（AD）でアミロイド形成を惹起する環境がある本病態では、Aβの他にもアミロイドを形成するタンパク質の存在が考えられ、当教室でこれまで、分泌タンパク質Milk Fat Globular Protein EGF-8（MFG-E8）が老人斑の中心部分に局在し、その周りをAβが囲むことを認めた。MFG-E8のアミロイド性はCongoRedのスペクトル変化によって調べた。タンパク質に結合したCongoRedは、タンパク質のアミロイド変化に伴って500nm付近ピークの長波長シフトが起こる。用いたリコンビナントMFG-E8は大腸菌と哺乳類培養細胞で発現した2種類を用意した。大腸菌では細胞内封入体に取込まれ、精製に変性過程を必要とする(rMFG-E8E)。一方、哺乳類培養細胞でリコンビナントMFG-E8(rMFG-E8m)は、細胞から分泌し、変性過程を経ずに精製でき、ネーティブに近いと考えられる。CongoRedスペクトル変化はrMFG-E8mでは、時間経過と共にピークの長波長シフトが観察され、アミロイド形成が進行することが示唆された。電顕でアミロイド繊維様の画像が観察された。しかし、rMFG-E8EのCongoRedスペクトルは最初から長波長シフトが認められ、電顕画像からもそのことが観察された。rMFG-E8Eは精製過程(変性・再生)でアミロイド化がすでに起こっていたと考えられる。次に、血漿MFG-E8を定量するために、rMFG-E8Eをマウスに免疫し、ELISAの系を確立し、183名のアルツハイマー病患者、51名のレビー小体型認知症、そして対照として420名の健常高齢者血漿でMFG-E8を測定した。その結果、アルツハイマー病患者の中でもApoE4を持つアルツハイマー病患者で、有意に血漿MFG-E8が上昇することが明らかになった。