肺胞II型細胞からの肺サーファクタント分泌調節機構の解析

肺泡II型细胞分泌肺表面活性物质的调控机制分析

• 批准号: 06857013
• 负责人: 相馬 仁
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857013/
• 关键词: 肺サーファクタント蛋白質; Ca^<2+>結合蛋白質; アネキシンIV; 肺胞II型細胞; サーファクタント分泌; リン脂質

肺サーファクタント蛋白質A(SP-A)は、肺胞II型細胞で合成・分泌される親水性のサーファクタント特異的蛋白質である。SP-AはCa^<2+>結合蛋白質で、C-端側に高親和性Ca^<2+>結合部位の存在することを、我々は既に明らかにしていた。この部位が細胞内での機能を持つ可能性を探ることを目的として本研究が遂行された。以下に研究実績を要約する。1.ヒトSP-Aをセファロース4Bに共有結合したアフィニティカラムを用いて、Ca^<2+>依存的にSP-Aに結合する細胞質蛋白質の存在を、牛肺において検討した。その結果、SDS-PAGE上、32kDaのバンドを示す主要蛋白質がEGTAよってカラムから溶出された。部分アミノ酸配列分析から、この32kDa-蛋白質はアネキシンIVであることが判明した。また、肺胞II型細胞質中にもアネキシンIVの存在が確認された。2.アネキシンIV、SP-A共にリン脂質結合蛋白質であるが、アネキシンIVとSP-AのCa^<2+>依存的結合は、蛋白質間の直接の相互作用に起因すると考えられた。3.肺サーファクタントは、II型細胞からラメラ封入体を形成して分泌される。ラット肺より単離したラメラ封入体をセファロース4Bに共有結合したアフィニティカラムに、Ca^<2+>存在下に肺細胞質画分をアプライした。EGTAにより溶出を試みた結果、溶出画分にアネキシンIVが主要蛋白質として含まれていた。4.単離したラメラ封入体に、アネキシンIVを加えたところ、Ca^<2+>依存的にラメラ封入体の凝集が惹起された。以上のことから、細胞質蛋白質であるアネキシンIVが、Ca^<2+>のシグナルを受けて、ラメラ封入体中に存在するSP-Aを認識することにより、サーファクタントの分泌と何らかのかかわりを持つ可能性が示された。

Lung protein A(SP-A) is synthesized and secreted by lung cell type II cells. SP-A has a Ca^<2+> binding protein and a C-terminal high affinity Ca^<2+> binding site. This study was carried out to explore the possibility of maintaining the function of these parts in cells. The following research results are offered. 1. The existence of cytoplasmic proteins associated with SP-A and Ca^<2+>-dependent SP-A binding in the presence of SP-A and B binding in the presence of Ca^<2+>-dependent SP-A. The results, SDS-PAGE and 32kDa protein profiles show that the major proteins are EGTA and EGTA. Part of the acid sequence analysis, the 32kDa-protein sequence was identified. The presence of P-type IV in the cytoplasm of lung cells was confirmed. 2. Investigation on the causes of Ca2 +-dependent binding between lipid binding proteins and SP-A co-proteins 3. Type II cells are secreted from the lung by the formation of an envelope. In the presence of Ca^<2+>, the cytoplasm of lung cells was separated and isolated. EGTA dissolution test results, dissolution test results, dissolution test results, 4. The aggregation of Ca2 +-dependent and Ca2 +-dependent species in the isolated species is initiated. The above results show that the existence of SP-A in the cytoplasm of protein IV, Ca^<2+>, Ca