迷走神経遠心性神経による消化管SIP Syncytium制御機構の解析

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本年度は、前年度に確立した迷走神経背側核へのGFP発現ウイルスインジェクションによる神経線維のラベリングと、消化管内に走行する当該GFP発現線維の同定後にFIB/SEM解析に進める光-電子相関顕微鏡観察法（Correlative Light-Electron Microscopy: CLEM法)において、より精度を高めるための手法の検討を行った。これまでに用いていた物理的マーキングよりピンポイントの線維の同定法を目指し、ビブラトームを用いたSemi-thin sectionによる試料作製を試みた。その結果、ビブラトームでのsection作製時に通常用いるアガロースやゼラチンなどの包埋剤と、消化管の切片組織との親和性が弱い点、また神経線維の走行がドット状に観察されるため同定が困難である点など、改善点は未だ必要であるものの、比較的観察領域が狭い部分に限局されるFIB/SEM観察において適した標本サイズで解析を効率的に進めることができると期待された。また、SIP Syncytiumを構成するInterstitial Cells of Cajal(ICC：カハールの介在細胞)やplatelet-derived growth factor receptor α(PDGFRα：線維芽細胞)にGFPがそれぞれ発現するトランスジェニックマウスを用いた実験を開始し、ウイルスなどのトレーサーインジェクションとの組み合わせにより、染色することなく、迷走神経線維とSyncytiumのインタラクションを同定することが可能となった。さらに、並行して進めている、迷走神経線維の出入り口である腸間膜に存在するマクロファージなどの免疫系細胞とPDGFRα陽性細胞との関連についても、損傷モデルを用いるなどして明らかにした他、本研究課題の解析法の主軸であるFIB/SEMを利用した神経細胞の解析も進めた。