TGF-betaシグナルに着目した栄養障害型表皮水疱症の線維化メカニズム

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本研究の目的は， RDEBにおける重篤な線維化の発症メカニズムを明らかにすることである．そのため，一般的なTGF-β活性化因子の各種阻害剤およびsiRNAを用いて，Latent TGF-β活性化メカニズムの解析をおこなった．結果を下記に示す．1) 培養RDEBFを各種阻害剤で処置したのちにLatent TGF-βを添加し，TGF-βシグナルおよび線維化関連タンパクの発現を評価した．各種阻害剤はすべて培養RDEBFのLatent TGF-β活性化を抑制したが，とくにROS阻害剤は抑制効果が高かった．またsiRNAを用いた検討では，インテグリンβ5およびMMP-2を阻害した際にLatent TGF-β活性化が強く抑制された．以上より，RDEBFにおいては主としてインテグリンβ5，MMP-2，ROSがLatent TGF-β活性化に関与していると考えられた．2) RDEB角化細胞(RDEBK)の皮膚線維化に及ぼす影響を調べるため， RDEBFとRDEBKを三次元培養し3D-RDEB培養皮膚モデルを作成した．各種阻害剤存在下でTGF-βシグナルおよび線維化を評価した．RDEBKとRDEBFを共培養した際には，RDEBKと正常線維芽細胞，正常角化細胞とRDEBFという組み合わせと比較して，有意にRDEBKおよびRDEBFにおけるTGF-β活性や線維化関連タンパクの発現が上昇していた．RDEBにおける線維化にはRDEBKとRDEBFの相互作用が重要な役割を果たしており,いずれかをcollectionすることで，重篤な線維化を抑制できる可能性が示唆された．3) VII型コラーゲンコーティング後にRDEBFを培養したところ，Latent TGF-β活性化が抑制された．このころからVII柄コラーゲン自体が活性化因子の発現や機能を抑制することで，TGF-βシグナルを制御していると考えられた．