TGF-betaシグナルに着目した栄養障害型表皮水疱症の線維化メカニズム

关注TGF-β信号的营养不良性大疱性表皮松解症的纤维化机制

基本信息

批准号：
20K08646
负责人：
赤坂英二郎
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は， RDEBにおける重篤な線維化の発症メカニズムを明らかにすることである．そのため，一般的なTGF-β活性化因子の各種阻害剤およびsiRNAを用いて，Latent TGF-β活性化メカニズムの解析をおこなった．結果を下記に示す．1) 培養RDEBFを各種阻害剤で処置したのちにLatent TGF-βを添加し，TGF-βシグナルおよび線維化関連タンパクの発現を評価した．各種阻害剤はすべて培養RDEBFのLatent TGF-β活性化を抑制したが，とくにROS阻害剤は抑制効果が高かった．またsiRNAを用いた検討では，インテグリンβ5およびMMP-2を阻害した際にLatent TGF-β活性化が強く抑制された．以上より，RDEBFにおいては主としてインテグリンβ5，MMP-2，ROSがLatent TGF-β活性化に関与していると考えられた．2) RDEB角化細胞(RDEBK)の皮膚線維化に及ぼす影響を調べるため， RDEBFとRDEBKを三次元培養し3D-RDEB培養皮膚モデルを作成した．各種阻害剤存在下でTGF-βシグナルおよび線維化を評価した．RDEBKとRDEBFを共培養した際には，RDEBKと正常線維芽細胞，正常角化細胞とRDEBFという組み合わせと比較して，有意にRDEBKおよびRDEBFにおけるTGF-β活性や線維化関連タンパクの発現が上昇していた．RDEBにおける線維化にはRDEBKとRDEBFの相互作用が重要な役割を果たしており,いずれかをcollectionすることで，重篤な線維化を抑制できる可能性が示唆された．3) VII型コラーゲンコーティング後にRDEBFを培養したところ，Latent TGF-β活性化が抑制された．このころからVII柄コラーゲン自体が活性化因子の発現や機能を抑制することで，TGF-βシグナルを制御していると考えられた．

这项研究的目的是阐明RDEB严重纤维化发作的机理。因此，我们使用常见TGF-β激活剂的各种抑制剂和siRNA分析了潜在的TGF-β激活机制。结果如下所示。 1）在用各种抑制剂处理培养的RDEBF后，添加潜在的TGF-β来评估TGF-β信号和纤维化相关蛋白的表达。所有各种抑制剂均抑制培养的RDEBF中的潜在TGF-β激活，但尤其是ROS抑制剂具有很高的抑制作用。此外，在siRNA研究中，当整联蛋白β5和MMP-2被抑制时，潜在的TGF-β激活被强烈抑制。基于上述，人们认为在RDEBF中，整合素β5，MMP-2和ROS主要参与潜在的TGF-β激活。 2）研究RDEB角化细胞（RDEBK）对皮肤纤维化的影响，我们在三维上培养了RDEBF和RDEBK，以创建3D-RDEB培养的皮肤模型。在存在各种抑制剂的情况下评估了TGF-β信号传导和纤维化。当共培养RDEBK和RDEBF时，与RDEBK和正常成纤维细胞的组合，正常角蛋白细胞和RDEBF的组合相比，RDEBK和RDEBF中TGF-β活性和与纤维化相关的蛋白的表达显着增加。 RDEBK和RDEBF之间的相互作用在RDEB的纤维化中起着重要作用，并且已经提出，其中任何一个的收集都可能抑制严重的纤维化。 3）当在VII型胶原蛋白涂层后培养RDEBF时，抑制了潜在的TGF-β激活。从此开始，人们认为VII斑块胶原本身通过抑制激活剂的表达和功能来调节TGF-β信号。

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Usefulness of mRNA Obtained from Peripheral Blood Mononuclear Cells to Analyze Consequences of Mutations in Epidermolysis Bullosa

从外周血单核细胞获得的 mRNA 用于分析大疱性表皮松解症突变后果

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yamashita Noriyuki;Kusaba Tetsuro;Nakata Tomohiro;Tomita Aya;Ida Tomoharu;Watanabe-Uehara Noriko;Ikeda Kisho;Kitani Takashi;Uehara Masahiro;Kirita Yuhei;Matoba Satoaki;Humphreys Benjamin D.;Tamagaki Keiichi;石村拓也，石井　輝，山田博之，中川靖章，大野祥子，生島昭恵，杉岡清香，半田貴也，桑原:宏一郎，柳田素子，横井秀基;Eijiro Akasaka
通讯作者：
Eijiro Akasaka

Availability of mRNA Obtained from Peripheral Blood Mononuclear Cells for Mutational Analysis in Dystrophic Epidermolysis Bullosa

从外周血单核细胞获得的 mRNA 用于营养不良性大疱性表皮松解症突变分析的可用性

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Oiwa T.;Ishibashi M.;Okuno T.;Ohba M.;Endo Y.;Uozumi R.;Ghazawi F.M.;Yoshida K.;Niizeki H.;Yokomizo T.;Nomura T.;Kabashima K.;Eijiro Akasaka
通讯作者：
Eijiro Akasaka

University of Freiburg(ドイツ)

弗莱堡大学（德国）