３次元培養を用いたYAP代謝プロファイルの研究

使用 3D 培养研究 YAP 代谢谱

• 批准号: 20K08862
• 负责人: 古元 礼子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08862/
• 关键词: Hippo経路; 代謝; ３次元培養; 遺伝子発現

本研究課題では、Hippo経路とその鍵分子YAP/TAZによるエネルギー代謝制御について、３次元細胞培養系を用いた研究を行う。Hippo経路は発生期において、形態形成、多分化能獲得、およびstemness（幹細胞らしさ）に関わり、組織の再生や発生過程で重要で①器官の大きさや発がんを抑制、②細胞間接着や細胞骨格刺激に応答し、細胞接着阻害や上皮間葉転換（EMT）に関与、③幹細胞の未分化能の維持、④細胞数や張力に応答、等の役割が知られている。通常の２次元培養では細胞は平面的に増殖しHippo経路は抑制されており、転写共役因子YAP/TAZは著しく活性化している。そのため、YAP/TAZの生理的な役割の解析には３次元培養系が必須である。そこで、本研究では３次元培養系による網羅的遺伝子発現解析結果に基づき、これまでの２次元培養では明らかにできなかったエネルギー代謝、コレステロール・脂質代謝等におけるYAPネットワークの全容を解明する。今年度は、前年度同様に各種細胞３次元培養系でのRNAseqの解析を行った。特に皮膚細胞に刺激を加えた場合の遺伝子発現パターンの変化を解析した。解析方法は、Gene Ontology解析のGESA（Gene Set Enrichment Analysis）およびDAVIDによるシグナル経路の拾い上げと既知のYAP/TAZ標的遺伝子の発現の変化を調べた。また、昨年度同様に代謝活性測定実験にも着手し、まずは３次元培養系でのATP活性測定を継続している。RPE1細胞およびHaCaT細胞のスフェロイドを作製し、細胞数、スフェロイドの形成後の時間経過によってATP活性がどのように変化するかを調べ、条件設定を行った。細胞の遺伝子変異の影響や各種刺激によるATP活性の変化の解析を実施中である。

This research topic is to study the use of YAP/TAZ as a key molecule in the Hippo pathway and in the metabolic control of three-dimensional cell culture systems. Hippo pathway is important for development, morphogenesis, acquisition of pluridifferentiation ability, stem cell viability, tissue regeneration and development (1) inhibition of organ development,(2) intercellular and cellular bone stimulation, cell adhesion inhibition, and epithelial mesenchymal turnover (EMT),(3) maintenance of stem cell undifferentiation ability,(4) cell number and tension, and (5) recognition of stem cell viability. In general, in two-dimensional culture, cell proliferation is inhibited by Hippo pathway, and YAP/TAZ is activated. YAP/TAZ physiological analysis of the three dimensional culture system must be. In this study, the results of gene expression analysis of the three-dimensional culture system were analyzed. The results of gene expression analysis of the two-dimensional culture system showed that the whole content of YAP was analyzed. The RNAseq analysis of various cell 3-D culture systems was carried out in the same way as in the previous year. In particular, skin cells are stimulated by the presence of DNA and its transformation. The analysis method is based on the GESA (Gene Set Enrichment Analysis) of Gene Ontology analysis and DAVID analysis. In addition, the metabolic activity determination of the same sample was carried out in the same year, and the ATP activity determination of the three-dimensional culture system was carried out in the same year RPE1 cells and HaCaT cells are regulated by cell number, time elapsed after cell formation, ATP activity, and condition setting. Changes in cellular DNA and the analysis of ATP activity in response to various stimuli are in progress.

项目成果

小児ラブドイド腫瘍の全ゲノムトランスポゾンプロファイリング

儿科横纹肌瘤的全基因组转座子分析

• 发表时间: 2020
• 作者: Amano S;Suenaga S;Hamamoto K;Yada S;Tsuyama T;Shinoda S;Tanaka Y;Takemoto Y;Harada E;Tanabe K;Asahara S;Hoshii K;Takami T.;泉川公一;早野崇英
• 通讯作者: 早野崇英

ノギンタンパク質を分泌する細胞およびそれを用いたオルガノイドの作製方法

分泌Noggin蛋白的细胞以及使用它们生产类器官的方法

• 发表时间: 2021