原発性限局性皮膚アミロイドーシスにおけるアポリポ蛋白E代謝異常の研究

原发性局限性皮肤淀粉样变性载脂蛋白E代谢异常的研究

• 批准号: 11770463
• 负责人: 古元 礼子
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770463/
• 关键词: 原発性限局性皮膚アミロイドーシス; アポリポ蛋白E; アポE分解産物; アミノ酸配列決定; アポリポ蛋白E(アポE)

原発性限局性皮膚アミロイドーシスの病変部組織にアポリポ蛋白E(アポE)とその分解産物が存在することが明らかになっている。その病変部に存在するアポEとその分解産物がどのように形成、沈着するかを明らかにすることが疾患の原因解明と治療に役立つと考え、次の検討を行った。1.病変部組織に存在するアポE分解産物のアミノ酸配列の解析アミロイドの存在する病変部から抽出したアミロイド蛋白を、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動後、PVDF膜にブロッティングした。アミドブラックで染色し、目的とする相対分子量14Kのところを切り取り、気相式プロテインシーケンサーABI-470Aでアミノ酸配列の決定を行った。結果:得られたアミロイド蛋白の純度が低く確定はできないが、14KのアポE分解産物はN末から166番目で切れたC末端ペプチドの可能性が考えられた。2.アポE分解産物の形成機序についての研究14KのアポE分解産物産物がどのように形成されるのか、血漿中に存在するアポEの経時的変化を調べた。健常者から採取した血漿を4℃で保存し、1ヶ月、6ヶ月で生じるアポE分解産物の量をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動後、イムノブロッティングを行い検討した。また、アポEの酸化修飾の影響も調べるため、窒素充填の有無で同様に検討した。結果:採血直後では14KのアポE分解産物産物は確認されなかったが、1ヶ月後では、分解産物産物が出現し、6ヶ月後ではその量が増加した。アポE分解産物産物形成への窒素による影響は認められなかった。アポEは血漿中の成分(酵素)によって分解されることが示唆された。よって、アポEが病変部に沈着し、その後分解される可能性が考えられた。

The original limited skin disease tissue contains protein E(APE) and its decomposition products. The cause of the disease is explained by the examination and analysis of the decomposition products. 1. Analysis of acid alignment in the presence of protein in the tissue of the disease, extraction of protein in the tissue of the disease, SDS-PAGE, electrophoresis, PVDF membrane The determination of the acid sequence of the ABI-470A is based on the molecular weight of 14K. The results showed that the purity of the protein was low, and the possibility of the protein decomposition product at 14K was low. 2. Study on the formation mechanism of the decomposition products of 14K and the regulation of the decomposition products of 14K in plasma. The amount of E decomposition products produced in healthy plasma samples after storage at 4℃ for 1 month and 6 months was investigated by SDS-PAGE. The influence of acid modification on the quality of the product is discussed. Results: After 14K, the decomposition products were identified, and after 1 month, the decomposition products appeared, and after 6 months, the amount increased. The decomposition products of E are formed into a series of pigments, which are affected by the decomposition of E. The components (enzymes) in the plasma are decomposed and the results are analyzed. The possibility of a breakdown is examined.