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Cushing病におけるUSP8変異体標的蛋白の同定と発症機序の解明

USP8突变靶蛋白的鉴定及库欣病致病机制的阐明

基本信息

批准号：
20K08899
负责人：
竹下章
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Okinaka Memorial Institute for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08899/
关键词：
クッシング病 USP8 CYP3A4

项目摘要

【背景】クッシング病は、ACTH産生下垂体腫瘍が原因の疾患である。クッシング病では高コルチゾール血症に関わらずACTHの持続的分泌が認められ、ネガティブフィードバック(NF)機構の破綻が特徴であるが、そのメカニズムは不明である。【方法と結果】ACTH産生下垂体腫瘍から抽出したRNAのうち、ACTHの前駆体であるPOMC遺伝子の発現が高い腫瘍3例と、低い腫瘍3例を選び、DNAマイクロアレイを用いて両群での遺伝子発現プロファイルを比較したところ、POMC遺伝子の発現が高い腫瘍でコルチゾール代謝酵素に関わるCYP3A4遺伝子発現が有意に高いことが判明した。このため50例の腫瘍RNAを用いて定量リアルタイムPCRを行い検証したところPOMC mRNAとCYP3A4 mRNA発現量に正の相関が認められた。CYP3A4モノクローナル抗体を用いた免疫染色を68例のACTH産生下垂体腫瘍で検討したところ、約60%が発現陰性、弱陽性が約20%、陽性が約20%でありCYP3A4 mRNAとCYP3A4免疫染色スコアに正の相関が認められた。またUSP8変異陽性のCushing病下垂体腺腫でCYP3A4発現が有意に高値であった。腫瘍の初代培養を用いた解析で生理濃度のコルチゾール(≧30 nM)や低濃度のデキサメタゾン(≧3 nM)で用量依存性にCYP3A4 mRNAと蛋白発現、CYP3A4の酵素活性の上昇が認められたことからグルココルチコイド受容体GRを介した正の発現調節が考えられた。【考察】ACTH産生下垂体腫瘍の約40%にCYP3A4の発現が認められた。高コルチゾール血症によりGRを介してCYP3A4発現が誘導されることでCYP3A4による腫瘍細胞内コルチゾールの代謝が促進されることがクッシング病におけるNF機構の破綻の成因に関与する可能性が示唆された。

Background: ACTH causes pituitary swelling. The characteristics of ACTH secretion in NF mechanism are unknown. [Methods and Results] ACTH-producing pituitary gland tumors were isolated from RNA and ACTH precursors in 3 cases, and POMC gene expression in 3 cases was high and low. DNA and POMC gene expression in 3 cases were compared. CYP3A4 gene expression in 3 cases was significantly higher than that in 3 cases. The results showed that the expression of POMC mRNA and CYP3A4 mRNA was positively correlated with each other. CYP3A4 mRNA immunostaining was used in 68 cases of ACTH production in pituitary tumors. About 60% of the cases were negative, 20% were weakly positive, and 20% were positive. CYP3A4 was found in pituitary adenomas with Cushing disease. In primary culture, CYP3A4 mRNA and protein production and CYP3A4 enzyme activity were detected in dose-dependent manner by analyzing physiological concentrations (≥ 30 nM) and low concentrations (≥ 3 nM). ACTH produces about 40% of pituitary tumors and CYP3A4 is detected. Hyperthyroidism is mediated by the induction of CYP3A4 expression, and CYP3A4 is mediated by the promotion of intracellular metabolism of CYP3A4. This indicates the relationship and possibility of the causes of NF mechanism defects.

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

下垂体機能評価のpitfall

垂体功能评估的陷阱

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Minemura Tomomi;Fukuhara Atsunori;Otsuki Michio;Shimomura Iichiro;竹下彰
通讯作者：
竹下彰

Immunohistochemistry or Molecular Analysis: Which Method Is Better for Subtyping Craniopharyngioma?

免疫组织化学或分子分析：哪种方法更适合颅咽管瘤分型？

DOI：
10.1007/s12022-020-09644-z
发表时间：
2020
期刊：
Endocrine Pathology
影响因子：
4.4
作者：
Fukuhara Noriaki;Iwata Takeo;Inoshita Naoko;Yoshimoto Katsuhiko;Kitagawa Masanobu;Fukuhara Hirokazu;Tatsushima Keita;Yamaguchi-Okada Mitsuo;Takeshita Akira;Ito Junko;Takeuchi Yasuhiro;Yamada Shozo;Nishioka Hiroshi
通讯作者：
Nishioka Hiroshi

Cushing病患者に対するGHRP-2負荷試験でのGHおよびACTH反応性の特徴

库欣病患者GHRP-2激发试验中GH和ACTH反应性特征