Fabrication of bioengineered sphincter construct with myoblast sheet

現在医師主導治験を進めている細胞シートのさらなる進化として生体材料である利点を生かした生理学的な機能の付加が期待される。加齢や疾病に伴う括約筋機能の低下は消化管において逆流性食道炎、便失禁など、尿路系においては排尿障害など種々の病態を引き起こし生命危機には直結しないものの生活の質の著しい低下を来す。これらの改善のために括約筋の再生医療を目的として薬剤に反応して収縮を行う細胞シートcontractile cell sheetの作成に着眼した。また次のステップとして細胞シートを輪状に立体配置して環状構造を形成することで収縮能を持つ環状収縮帯の再生を計画している。今年度は以下の研究を予定していたが、コロナ禍のため、他施設による実験内容の相談などが十分に行えなかった。日本再生医療学会など関連学会などに可能な限り参加をし、情報収集を行うことが出来た。実験に用いる確立されたマウス筋芽細胞株C2C12を入手、管腔構造作成のscaffoldとして用いるための小腸脱細胞化骨格作成なおの準備を進めているものの、現時点において実施出来ていない状況である。１．ラットの大腿筋組織もしくは確立された筋芽細胞を分離調整し、筋細胞への分化誘導を行う。筋細胞への分化はtotal RNAを抽出し逆転写酵素を用いたqRT-PCRを行うことで確認する。２．収縮能の獲得に重要な筋繊維の走行をそろえるべく、コラゲン膜コーティング培地にてconfluentな状態にて伸展刺激を加え刑事的に細胞形質変化を観察する。形質変化に伴って筋芽細胞、筋管細胞、筋繊維のマーカーであるMyoD、Mogenin遺伝子の発現をRT-PCRにて確認する。３．温度応答性培養皿上にて筋芽細胞を筋繊維の走行がそろった状況で培養し収縮能を有する筋細胞シートの作成を行う

現在医師主導治験を進めている細胞シートのさらなる進化として生体材料である利点を生かした生理学的な機能の付加が期待される。加齢や疾病に伴う括約筋機能の低下は消化管において逆流性食道炎、便失禁など、尿路系においては排尿障害など種々の病態を引き起こし生命危機には直結しないものの生活の質の著しい低下を来す。これらの改善のために括約筋の再生医療を目的として薬剤に反応して収縮を行う細胞シートcontractile cell sheetの作成に着眼した。また次のステップとして細胞シートを輪状に立体配置して環状構造を形成することで収縮能を持つ環状収縮帯の再生を計画している。今年度は以下の研究を予定していたが、コロナ禍のため、他施設による実験内容の相談などが十分に行えなかった。日本再生医療学会など関連学会などに可能な限り参加をし、情報収集を行うことが出来た。実験に用いる確立されたマウス筋芽細胞株C2C12を入手、管腔構造作成のscaffoldとして用いるための小腸脱細胞化骨格作成なおの準備を進めているものの、現時点において実施出来ていない状況である。１．ラットの大腿筋組織もしくは確立された筋芽細胞を分離調整し、筋細胞への分化誘導を行う。筋細胞への分化はtotal RNAを抽出し逆転写酵素を用いたqRT-PCRを行うことで確認する。２．収縮能の獲得に重要な筋繊維の走行をそろえるべく、コラゲン膜コーティング培地にてconfluentな状態にて伸展刺激を加え刑事的に細胞形質変化を観察する。形質変化に伴って筋芽細胞、筋管細胞、筋繊維のマーカーであるMyoD、Mogenin遺伝子の発現をRT-PCRにて確認する。３．温度応答性培養皿上にて筋芽細胞を筋繊維の走行がそろった状況で培養し収縮能を有する筋細胞シートの作成を行う