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Ror1の新規シグナル伝達タンパク質の同定および筋芽細胞分化制御機構の解析

新型Ror1信号蛋白的鉴定及成肌细胞分化调控机制分析

基本信息

批准号：
17K15596
负责人：
林真琴
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-01 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K15596/
关键词：
衛星細胞筋芽細胞 Ror1 シグナル伝達

项目摘要

骨格筋には筋組織特異的な幹細胞である衛星細胞（SCs: satellite cells）が存在し、SCsは筋組織の損傷時の修復・維持の過程などで中心的な役割を担っている。正常時の筋組織では、SCsは筋管と基底膜の間に存在し静止期の状態にあるが、損傷を受けた筋組織では、SCsの活性化が起こり、SCsを介した筋組織の修復が開始する。活性化したSCsは細胞増殖を開始し、非対称分裂によって筋芽細胞前駆細胞を産生する。筋芽細胞前駆細胞は増殖を繰り返した後、増殖を停止して筋芽細胞に分化する。最終的に、筋芽細胞は互いに融合して筋管となり、損傷部位の修復を行う。私たちはWnt非古典的シグナルを担うRor1が筋芽細胞で発現していることを見出した。そこで、筋芽細胞分化におけるRor1の役割を明らかにするために、Ror1の基質タンパク質の同定を計画した。そのために、野生型Ror1タンパク質のC末端（細胞質内ドメイン）にビオチンキナーゼ（BioL）を付加した融合タンパク質（Ror1 WT-BioL）、およびRor1のチロシンキナーゼ活性を欠失させた変異体タンパク質（Ror1 DK）のC末端にビオチンキナーゼを付加した融合タンパク質（Ror1 DK-BioL）を発現するプラスミド発現ベクターを構築した。これらのプラスミド発現ベクターをマウス筋芽細胞株C2C12細胞に一過的遺伝子導入を行い、ウエスタンブロッティング法を用いてRor1 WT-BioLおよびRor1 DK-BioLタンパク質の発現を確認した。さらに、プラスミド発現ベクター内のネオマイシン耐性遺伝子を利用して、これらのタンパク質を恒常的に発現するC2C12細胞の樹立を行った。今後、これらのRor1-BioL発現C2C12細胞はクローン化および筋芽細胞分化能の確認を行ったのち、Ror1の基質タンパク質同定実験の研究に利用可能である。

骨骼肌萎缩侧索硬化症患者的骨骼肌细胞中的卫星细胞（SC：satellite cells）大量存在，SC可通过骨骼肌萎缩侧索硬化修复修复·维持骨骼肌过程中心的骨骼肌切割承担正常功能。正常妊娠期终止妊娠，SC导管基底膜破裂存在终止期静止不动，妊娠期受感染者死亡，SC活化后提起诉讼，SC介导妊娠期终止修补，开始妊娠。活性化造血干细胞发现裂殖初期，非典型增生的造血干细胞前增殖细胞发生凋亡。筋芽細胞前駆細胞は増殖を繰り返した後、増殖を停止して筋芽細胞に分化する。最終的に、筋芽細胞は互いに融合して筋管となり、損傷部位の修復を行う。Wnt非经典的免疫抑制剂Ror1免疫抑制细胞凋亡抑制剂orm免疫抑制剂担载出瘤。细胞分裂素，细胞分化素Ror1磷酸酶切割明了的细胞分裂素，Ror1磷酸基转移酶切割明了的细胞分裂素，Ror1磷酸基转移酶同样确定了诱导素。维生素C受体、新生型Ror 1终末型C受体、终末型C受体。细胞增殖抑制剂可抑制肿瘤细胞株C2C12细胞中的一种或几种的增殖子进入行内，并可抑制肿瘤细胞增殖抑制剂的产生。免疫抑制剂，免疫抑制剂，免疫内分泌护理剂，抗氧化性精子利用剂，免疫抑制剂，免疫调节剂，非常规的免疫抑制剂，C2C12细胞免疫抑制剂。此外，Ror1-BioL C2C12细胞增殖抑制剂可抑制C12细胞分化，Ror 1-BioL C2C12细胞增殖抑制剂可抑制C12细胞分化，Ror1-BioL C2 C12细胞增殖抑制剂可抑制C12细胞分化，Ror1-BioL C2 C12细胞增殖抑制剂可抑制C12细胞分化。