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腸内細菌叢メタゲノム解析による閉塞性黄疸に伴う肝再生障害改善療法の開発

通过肠道微生物群宏基因组分析开发改善与梗阻性黄疸相关的肝再生障碍的疗法

基本信息

批准号：
20K09101
负责人：
清水明
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09101/
关键词：
腸内細菌叢メタゲノム解析肝再生胆汁鬱滞

项目摘要

閉塞性黄疸に伴う胆汁鬱滞など、腸肝循環に劇的な変化をもたらす病態では、腸内細菌叢にもバランスの乱れが起こり、肝再生能力も障害されている可能性が極めて高いと考えられるが、その機序は不明である。またこれまで腸内細菌叢メタゲノム解析と肝再生の関係につき明らかにした研究はなく、さらに胆道ドレナージや胆汁還元、さらにはシンバイオティクスといった腸肝循環や腸内環境に大きな影響をもたらす治療が腸内細菌叢にいかなる変化を与えるのかも全く知られていない。そこで、閉塞性黄疸では腸内細菌叢の乱れが生じ，肝再生が阻害されるのではないか、また腸内細菌移植・シンバイオティクスなどの腸内環境回復治療により肝再生能力が改善するのではないか、という作業仮説をたて、令和2年から3年度において以下の実験系を行った。【実験1-A】胆汁鬱滞ラットモデルの作成：F344/NSlcラット雄8週齢をもちいて、総胆管結紮による胆汁鬱滞モデルを作製した。術後2週間において血清を採取し総ビリルビン値を確認、閉塞性黄疸となっていることを確認した。また、胆汁鬱滞モデルの血清Alb値、AST, ALT値の推移も各time pointで確認した。【実験1-B】胆汁鬱滞ラットモデル、コントロールモデルに対して肝切除を付加し、残肝容積増大を確認、比較検討し、データ集積のための適正な肝切除時期ならびに検体採取時期の設定を行った。【実験2】胆汁鬱滞ラットモデルにおける糞便中腸内細菌DNA検出と16SrRNA遺伝子増幅：作製した胆汁鬱滞ラットモデルから採取した糞便より腸内細菌DNAを抽出し、DNA中に含まれる真正最近由来16SrRNA遺伝子をPCR法により増幅し、微生物群集構造解析用のサンプルを作製した。【実験3】胆汁鬱滞ラットモデルにおけるメタボローム解析：作製した胆汁鬱滞ラットモデルから、網羅的メタボローム解析を行うための肝組織、ならびに十二指腸および空腸組織サンプルを採取保存した。

Red jaundice associated with cholestasis, changes in enterohepatic circulation, pathologies, intestinal bacterial flora, disorders of liver regeneration, and the possibility of impairment of liver regeneration are extremely high and the mechanism is unknown. The relationship between intestinal bacterial flora and liver regeneration is studied, and the biliary tract and bile return are studied. The intestinal hepatic circulation and intestinal environment are affected by the treatment of intestinal bacterial flora. In addition, the intestinal flora of patients with red jaundice is disturbed, liver regeneration is inhibited, intestinal bacteria transplantation is carried out, and the intestinal environment recovery treatment is carried out. The liver regeneration ability is improved. The operation is carried out in the following three years. [1-A] Cholestasis is produced by: F344/NSlc, male, 8 weeks old, bile duct ligation, cholestasis is produced by: Two weeks after surgery, the serum was taken to confirm the jaundice. The serum Alb value, AST, ALT value of cholestasis and cholestasis were confirmed at each time point. [1-B] Cholestasis status status check, comparison check, collection check, appropriate hepatectomy time check, and sample collection time check. 2. DNA detection and amplification of 16S rRNA gene in feces from cholestatic patients: DNA extraction and PCR amplification of 16S rRNA gene in feces from cholestatic patients; DNA detection and amplification of 16S rRNA gene in feces from cholestatic patients; and DNA detection and amplification of 16S rRNA gene in feces from cholestatic patients. [Reality 3] Analysis of cholestasis: The liver tissue, duodenum and jejunum tissue support elements were preserved during the preparation of cholestasis and the analysis of the network.