アルギン酸包埋ヒト間葉系幹細胞関節内注射による変形性関節症疾患修飾薬の開発

通过关节内注射海藻酸盐包埋的人间充质干细胞开发骨关节炎疾病缓解药物

• 批准号: 20K09411
• 负责人: 内尾 祐司
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09411/
• 关键词: 変形性関節症; アルギニン酸ゲル; REC; アルギン酸ゲル; REC細胞; アルギン酸ゲル包埋REC; OA疾患修復薬

本研究の目的は高品質高純度ヒト間葉系幹細胞RECを高純度アルギン酸ゲル内に包埋し、OA動物モデルに投与し、アルギン酸ゲル包埋RECによるOAへの治療効果を検証し、DMOADとしての有効性と安全性を明らかにすることである。今年度の実績を以下に記す。ヒト骨髄細胞よりRECを分離した。ヒト正常軟骨細胞、滑膜細胞を使用（白人種）を用いて、24well plateを使用し、2.0*104ずつ播種した。炎症刺激は IL-1β 2ng/mlを使用し、共培養は穴あきのインサートにRECも2.0*104播種した。24時間後にRNA回収して、real-time PCR GAPDHを用いたΔΔCt法でMMP-3、IL-6、TNF-αのmRNAの発現を調べた。その結果、 IL-1β で軟骨細胞および滑膜細胞のMMP-3、IL-6、TNF-αのmRNA発現が亢進するが、REC共培養によるこれらの発現を抑制できなかった。一方、日本白色家兎の前十字靱帯切離を行ったOAモデルにアルギニン酸包埋RECを移植し、4週後関節を取り出し、肉眼的、組織学的評価と力学的評価を行った。肉眼的にはRECはOAを抑制しているように見えたが、組織学的・生体力学的には有意な差を見いだすことはできなかった。しかし、マクロファージにRECを共培養するとマクロファージタイプ2の割合が増えることがセルソーティングで明らかになった。これらの所見からRECが修復型マクロファージタイプ2を活性化させる可能性があって、軟骨細胞や滑膜細胞に直接的には影響を与えないかもしれないが、炎症・免疫系細胞を介して間接的にOAの修復に働く可能性があると考えた。このため、目下、RECの細胞条件、至適ロットの選定を探索するとともに、炎症・免疫系細胞に対しての共培養を行い、炎症性サイトカイン刺激時の炎症・免疫系細胞のサイトカイン発現を検討中である。

The aim of this study was to demonstrate the therapeutic efficacy of OA by embedding high-purity mesenchymal stem cells into REC and OA animals, and to clarify the safety of DMOAD. The results for the year are set out below. The bone marrow cells were isolated. Normal chondrocytes and synovial cells are used (white species), 24well plates are used, 2.0*104 seeds are used. Inflammatory stimulation IL-1β 2ng/ml, co-culture, REC 2.0*104 seeding mRNA expression of MMP-3, IL-6 and TNF-α was modulated by ΔΔCt method after 24 hours of RNA recovery and real-time PCR GAPDH. The results showed that MMP-3, IL-6 and TNF-α mRNA expression in chondrocytes and synovial cells was increased and inhibited by REC co-culture. A side, Japanese white house before the cross-section of the cut, OA, acid embedded REC, transplant, 4 weeks after the joint extraction, naked eye, histological evaluation, mechanical evaluation To the naked eye, the REC is inhibited, to the histology, to the biology, to the intentionality. The first is the first time that a child has been born. The possibility of activation of REC, repair type, chondrocyte and synovial cells directly affects OA, inflammation and immune system cells indirectly. This article discusses the cell conditions of REC, selection of optimal cells, inflammation, immune system cell co-culture, inflammation, immune system cell development during stimulation of inflammatory cells.