遺伝性角膜疾患に対する遺伝子治療実現のための基盤技術の確立

建立实现遗传性角膜疾病基因治疗的基础技术

• 批准号: 20K09808
• 负责人: 臼井 智彦
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: International University of Health and Welfare
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09808/
• 关键词: 遺伝性角膜疾患; 遺伝子治療; 角膜ジストロフィ; CRISPR/Cas9; TGFBI

令和4年度に引き続き本年度においても、我々が作製したTGFBI角膜ジストロフィモデルマウスである、TGFBI-R124C変異マウスを用い、clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR) - CRISPR-associated 9 (CRISPR-Cas9）システムによる遺伝子編集について、その再現性について検討を行った。しかし動物飼育について、交配がうまくいかなくなったことから、胚保存より起こし、新たに実験用マウスの樹立を試みている。このようなCRISPR-Cas9システムはTGFBI角膜ジストロフィのみならず、他の遺伝性疾患にも有用であり、別の遺伝性角膜疾患である、フックス内皮角膜変性症においても、疾患モデルやCRISPRを用いたコンストラクトの検討と開発も行った。TGFBI角膜ジストロフィは角膜混濁を来すことから視機能が低下するが、その混濁形成に関するメカニズムはほとんどわかっていない。そのメカニズムの解明は遺伝子治療確立のために重要である。そのためTGFBI角膜ジストロフィ患者の手術検体より採取した角膜実質細胞からのcell lineの樹立し、in vitroでの解析を試みた。現在R124H, L527R、A546Rなどいくつかの変異細胞のprimary cultureを作製している。またコントロールとしては実験用ヒト角膜（アメリカより輸入）から角膜実質細胞のprimary cultureを作製し、現在不死化に向けた準備を行なっている。さらに、実際のTGFBI角膜ジストロフィ患者において混濁がどのように視機能に影響しているか、についての臨床研究も試みた。TGFBI角膜ジストロフィ患者の各病型に対して前眼部光干渉断層計を用い、フーリエ解析を行ったところ、格子状角膜ジストロフィでは前後面の不整性が視力に影響し、一方顆粒状角膜ジストロフィでは散乱がより強く視力に影響していた。同じTGFBIジストロフィであっても混濁様式が変われば、視力に影響している因子が異なることが判明した。

Reiwa 4th year's にuhinき続きthis year's においても, I 々がproduced したTGFBI cornea ジストロフィモデルマウスである、TGFBI-R124C変differentマウスを用い、clustered Regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR) - CRISPR-associated 9 (CRISPR-Cas9) システムによる伝子集 について, そのReproducibility について検 Discussion を行った.しかしAnimal breeding and breeding, mating and breeding , the embryo is preserved and the new one is established, and the new one is established with the new one.このようなCRISPR-Cas9 システムはTGFBI cornea ジストロフィのみならず, other rickets disease にもuseful であり, bie no 伝Endothelial corneal disease, endothelial corneal disease, endothelial corneal disease, diseaseルやCRISPR を Use the いたコンストラクトの検と开発も行った. TGFBI corneal opacity, corneal opacity, low visual functionするが, そのturbidity forms に关するメカニズムはほとんどわかっていない.そのメカニズムの解明は伝子treatment established the important である of the のために. The TGFBI cornea patient's surgery is performed on the patient's body, and the corneal cell line is established and analyzed in vitro. Currently, R124H, L527R, and A546R are produced using primary culture of different cells.またコントロールとしては実験用ヒトcornea (アメリカより input) からcorneal 実stromal cellのprimary Cultureをproducedし, now immortalに Xiangたpreparationを行なっている.さらに、実记のTGFBI cornea ジストロフィpatient においてturbidity がどのように Effect of visual function しているか, についての clinical research もtestみた. TGFBI corneal cornea patient's various disease types: Anterior eye photointerference tomography, Fiber analysis, and lattice-shaped cornea The unevenness of the front and back of the cornea does not affect the vision, and the granular cornea on one side affects the visual acuity. Same as TGFBIジストロフィであってもturbid様styleが変われば, eyesight にaffected しているfactor がdifferent なることが clarificationした.

项目成果

Genome editing in vivo for TGFBI corneal dystrophy mice using CRISPR/Cas9 system

使用 CRISPR/Cas9 系统对 TGFBI 角膜营养不良小鼠进行体内基因组编辑

• 发表时间: 2021
• 作者: Omoto T;Kitamoto K;Toyono T;Miyai T;Yamagami S;Usui T
• 通讯作者: Usui T

CRISPR-Cas9によりTCF4遺伝子のCTGリピート伸長FECD細胞モデル

通过 CRISPR-Cas9 对 TCF4 基因进行 CTG 重复扩增的 FECD 细胞模型

• 发表时间: 2022
• 作者: 陳リイ;大内靖夫;神川あずさ;橋本友美;北本昴大;豊野哲也;相原一;臼井智彦;宮井尊史
• 通讯作者: 宮井尊史

TGFBI角膜ジストロフィの基礎と臨床

TGFBI角膜营养不良的基础知识和临床实践

• 发表时间: 2022
• 作者: Zhu J;Inomata T;Di Zazzo A;Kitazawa K;Okumura Y;Coassin M;Surico PL;Fujio K;Yanagawa A;Miura M;Akasaki Y;Fujimoto K;Nagino K;Midorikawa-Inomata A;Hirosawa K;Kuwahara M;Huang T;Shokirova H;Eguchi A;Murakami A.;清水 美穂，池田 陽子，森 和彦，今泉 寛子，上野 盛夫，吉井 健悟，木下 茂.;臼井智彦
• 通讯作者: 臼井智彦

TGFBI遺伝子のL527R変異に伴う片眼性格子状角膜ジストロフィの1例

TGFBI基因L527R突变相关单侧格子状角膜营养不良1例

• 发表时间: 2023
• 作者: 池田瑞希;臼井智彦
• 通讯作者: 臼井智彦

最新主要文献で見る眼科学レビュー 2021-2022 6. 角膜疾患

基于最新主要文献的眼科综述2021-2022 6.角膜疾病

• 发表时间: 2022
• 作者: Tomita Ryo;Iwase Takeshi;Fukami Marie;Goto Kensuke;Ra Eimei;Terasaki Hiroko;臼井智彦
• 通讯作者: 臼井智彦