テロメラーゼ導入ヒト角膜内皮細胞の再生角膜作製への応用

端粒酶转导人角膜内皮细胞在再生角膜生产中的应用

• 批准号: 15790977
• 负责人: 臼井 智彦
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790977/
• 关键词: 再生医療; 角膜; 遺伝子導入; 細胞移植

本研究の第一の目的は、hTERT遺伝子導入によるヒト角膜内皮細胞の不死化細胞株の樹立であった。昨年度プラスミドでhTERT遺伝子を導入したヒト培養角膜内皮細胞は不死化が得られなかった。遺伝子導入効率の低さやhTERTだけでは不死化が得られない可能性が考えられたため、ウイルスベクターを用い、またhTERTだけでなく、同時にSV40遺伝子も導入した。その結果不死化したヒト角膜内皮細胞の細胞株を10株以上クローニングすることに成功した。不死化した角膜内皮細胞が、従来の角膜内皮細胞の特徴を持ち合わせているかどうか、角膜内皮恒常性維持に重要な分子の発現を検討したところ、角膜内皮細胞に重要な各種イオン輸送体やチャンネルが発現していることを確認した。また生理学的な機能的発現の検討によりこの不死化したヒト角膜内皮細胞は従来の初代培養角膜内皮細胞と同等のイオン輸送、細胞内pH調節、水輸送機能を有していることが確認された。さらに不死化角膜内皮細胞をコラーゲンシートの上で培養したものが機能的に再生角膜作製や移植に問題ないことを確認した。

The first purpose of this study is to establish the immortalized cell line of corneal endothelial cells by introducing hTERT genes into them. Last year, the hTERT legacy of hTERT was introduced and the corneal endothelial cells were cultured and immortalized. The efficiency of importing the remains is low, and the possibility of becoming immortal is low.ウイルスベクターを用い, またhTERTだけでなく, and にSV40 缝子も Import した. As a result, more than 10 cell lines of corneal endothelial cells were immortalized, and the results were successful. It is important to maintain the homeostasis of the corneal endothelium. The molecular structure is important, the corneal endothelial cells are important, and the various transporters are confirmed.またphysiological function of the present の検褜 によりこの immortalization したヒトcorneal endothelial cells は従来のPrimary culture horn Membrane endothelial cells have the same functions of transporting water, regulating intracellular pH, and transporting water. The function of immortalized corneal endothelial cells and the culture of the corneal endothelial cells have been confirmed.