S1Pによる歯乳頭由来幹細胞の象牙芽細胞分化誘導と歯髄血管再生療法への応用

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昨年度に引き続き、マウス歯乳頭尖端前駆細胞 (iSCAP)に、S1PおよびBMP-9を添加し、象牙芽細胞分化に及ぼす影響について検討した。前年度、象牙芽細胞分化マーカー発現が安定しなかったため、石灰化誘導培地下で再検討し、S1P添加後1-14日の象牙芽細胞分化マーカーmRNA発現について解析した。Dentin sialophosphoprotein (DSPP)、Dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1) mRNA発現は、S1P、BMP-9添加により1日目から有意に増加した。Matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE) は7日目から発現を認め、S1P、BMP-9添加により14日目で有意に増加した。次に、S1P受容体のひとつであるS1PR1の阻害剤W146を添加すると、S1PによるDSPP、DMP-1発現増加は有意に抑制され、MEPEも抑制傾向を示した。一方で、W146の添加は、BMP-9によるDSPP、DMP-1、MEPEの発現増加に影響を及ぼさなかった。また、DSPPのタンパク質分泌について、ELISA法により検討したところ、S1P添加により3日目で有意に増加した。この発現増加は、mRNA発現と同様にW146添加により有意に抑制された。他方、BMP-9添加により、DSPPタンパク質発現は7日目で増加したが、W146は影響を及ぼさなかった。また、iSCAPを脂肪細胞分化誘導培地下で培養すると脂肪滴が形成され、脂肪細胞に分化した。S1Pの添加により脂肪滴の形成は抑制され、W146を添加するとS1Pによる脂肪的形成抑制作用は阻害された。以上のことから、S1PR1シグナルがiSCAPの象牙芽細胞分化、脂肪細胞分化抑制に関与する可能性が考えられた。