Analysis of cancer immune response using a virtual lymph node metastasis model

使用虚拟淋巴结转移模型分析癌症免疫反应

• 批准号: 20K10141
• 负责人: 熊丸 渉
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10141/
• 关键词: 口腔扁平上皮癌細胞株; シングルセル; がんの不均一性・多様性; シングルセル樹立法; 口腔扁平上皮癌細胞; 口腔癌; 癌免疫; 癌免疫応答; 仮想リンパ節転移モデル

がんの不均一性・多様性を解明するうえで、さまざまなタイプのシングルセル由来細胞での解析が重要と考えられる。口腔扁平上皮癌細胞株（WK2）の初代培養より早期に保存された癌細胞よりシングルセル由来の細胞を樹立した。形態学的には、通常の癌細胞の形態をした角化細胞様細胞が大多数を占めていたが、基底細胞様細胞（13-5）と遊走しながらゆっくり分裂する細胞(3-12)を樹立した。角化細胞様細胞8種類と基底細胞様細胞（13-5）および遊走しながらゆっくり分裂する細胞(3-12)について、細胞倍加時間とSphere形成能および遺伝子発現解析（RNA-seq）を行った。結果1)細胞倍加時間とSphere形成能について、8種類の角化細胞様細胞は、2種類（8-16,4-14）以外は分散されていた。13-5と3-12は共に、細胞倍加時間が高く、Sphere形成能が低かった。2）10種類の細胞うち、GFPの導入が可能であった6種類のシングルセル由来細胞をヌードマウス（BALB/cAJcl-nu/nu）の舌に移植したが、腫瘍形成が認められず、再実験が必要である。3)遺伝子発現解析（RNA-seq）について、ヒートマップでは、12-22、（4-14,10-14,9-22,8-16）、（17-13,13-9,20-16）、（3-12,13-5）に大まかに分類され、細胞倍加時間とSphere形成能と比較して、（17-13,13-9,20-16）以外はサブクローンの近い集団であった。現在、特異なサブクローンと考えられる遊走しながらゆっくり分裂する細胞(3-12)についての遺伝子発現を解析中である。

人们认为，对各种类型的单细胞衍生细胞的分析对于阐明癌症的异质性和多样性很重要。与口服鳞状细胞癌细胞系（WK2）的原代培养物（WK2）相比，单细胞衍生的细胞是从癌细胞中建立的。从形态上讲，大多数是角质形成细胞样细胞，它们处于正常癌细胞的形态中，但是建立了与基底细胞样细胞缓慢分裂的细胞（13-5）。细胞加倍时间，球体形成能力和基因表达分析（RNA-SEQ）在八种类型的角质形成细胞样细胞，基础样细胞（13-5）上进行，以及在迁移时缓慢分裂的细胞（3-12）。结果1）关于细胞加倍时间和球体形成能力，除两种类型（8-16,4-14）外，还分散了八种类型的角质形成细胞样细胞。 13-5和3-12均具有较高的细胞双倍时间和低球体的形成能力。 2）在10种细胞中，可以将六个可以用GFP引入的单细胞衍生的细胞植入裸鼠的舌头（BALB/CAJCL-NU/NU），但没有观察到肿瘤的形成，因此需要重新体验。 3) Regarding gene expression analysis (RNA-seq), the heatmap roughly categorized into 12-22, (4-14, 10-14, 9-22, 8-16), (17-13, 13-9, 20-16), and (3-12, 13-5), and compared with cell doubling time and Sphere formation ability, the populations were close to subclones except (17-13, 13-9, 20-16).当前，正在分析迁移和缓慢分裂细胞的基因表达（3-12）被认为是独特的亚克隆。