改良型cDNAライブラリー法を用いた癌関連抗原の同定と腫瘍免疫療法

使用改进的 cDNA 文库方法鉴定癌症相关抗原和肿瘤免疫治疗

• 批准号: 18890139
• 负责人: 熊丸 渉
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890139/
• 关键词: 腫瘍免疫療法; CTL; サブトラクション; 癌関連抗原; 腫瘍免疫

腫瘍関連抗原ペプチドで細胞傷害性T細胞(CTL)の誘導を試みたところ、SART-1_<690-698>(22.0%)、SART-2_<93-101>(20.0%)、SART-2_<161-169>(2.9%)、SART-2_<899-907>(14.3%)、SART-3_<109-118>(14.3%)、SART-3_<315-323>(11.4%)、CyB_<84-92>(14.3%)、CyB_<91-99>(0%)、1ck_<208-210>(11.4%)、1ck_<486-494>(17.1%)、1ck_<488-497>(5.7%)、ART4_<13-20>(5.7%)、ART4_<75-84>(20.0%)であった。口腔扁平上皮癌患者のペプチドワクチンには、SART-1_<690-698>、SAR-2_<93-101>、ART4_<75-84>が有用であることが示唆されたが、有用と思われるものでもCTLの誘導が20数%であった。そこでCTLが認識する癌細胞特異的な新規癌抗原を発見する目的で、まず口腔扁平上皮癌細胞株(WK2)を樹立した。HLA(human leukocyte antigen)を一致させテーラーメイド治療が可能となるように同一患者から得られた線維芽細胞と末梢血単核球(PBMC)を実験に用いた。マイトマイシンC処理したWK2とPBMCを共存培養してWK2特異的なCTLを誘導した。WK2特異的なCTLとWK2、線維芽細胞とを共存培養したところWK2のみに細胞障害性を認めた。CTLが認識する癌細胞特異的な新規遺伝子を発見する目的でWK2から抽出したcDNAと同一患者の線維芽細胞から抽出したmRNAをハイブリダイズさせ、ハイブリダイズしなかった癌特異的なcDNAをSubtraction法を用いて分離した。完全長のcDNAを得る目的であらかじめadaptorを付加したプライマーを用い、SMART法でcDNAを合成した。癌特異的なcDNAをLD-PCR法を用いて増幅した。増幅したcDNAを同一患者の線維芽細胞に導入して共存培養したところWK2特異的なCTLによって細胞障害性を認めた、この実験系は癌免疫療法のテーラーメイド治療への応用が可能である。

The induction of cytotoxic T cells (CTL) by tumor-associated antigen selection was studied. SART-1_<690-698>(22.0%), SART-2_ (20.0%), SART-2<93-101>_(2.9%), SART<161-169>-2_<899-907>(14.3%), SART-3_<109-118>(14.3%), SART-3_<315-323>(11.4%), CyB_<84-92>(14.3%), CyB_<91-99>(0%), 1ck<208-210>_(<486-494>17.1%), 1ck_<488-497>(5.7%), ART4_ (5.7%), ART4<13-20>_<75-84>(20.0%) were detected. The induction of CTL in patients with oral squamous cell carcinoma was 20%, SART-1_<690-698>, SAR-2_<93-101>and ART4_<75-84>. To identify new cancer cell specific antigens for CTL, an oral squamous cell carcinoma cell line (WK2) was established. HLA(human leukocyte antigen) can be used in the treatment of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the same patient. WK2 and PBMC co-culture WK2-specific CTL and WK2-line bud cells co-cultured with WK2-line bud cells were identified for cell damage. To identify new genes specific to cancer cells, CTL uses the Subtraction method to isolate cDNA extracted from the same patient's vascular cells. Complete cDNA synthesis by SMART method Cancer-specific cDNA amplification by LD-PCR The cDNA was introduced into the cells of the same patient and co-cultured with WK2-specific CTL to identify the cell barrier. This is a possible therapeutic use for cancer immunotherapy.