Development of LC-MS/MS analysis method for drugs and poisons in blood using a new pretreatment method and examination of its evaluation method

本年度は、LC-MS/MS測定時のマトリックス効果評価法を模索した。一般的に、マトリックス効果は米国FDAガイドライン等で定められた、標準液とブランク試料を前処理したマトリックスサンプルに標準物質を同濃度添加した溶液を分析し、得られたMSクロマトグラムの面積を比較する方法で評価されている。しかし、LC-MS/MS分析において、マトリックスを含むサンプルを測定した前後で比較すると、同じ標準物質でも得られるクロマト面積が小さくなり、内部標準による補正もないため、マトリックス効果の評価が正しく行うことができなくなっている事が明らかとなった。これは、リン脂質を始めとするマトリックス効果原因物質のキャリーオーバーが原因と考えらた。そこで、従来のLCグラジエントに加え、リン脂質除去のために追加の洗浄フェーズを設けることで、感度低下が大幅に改善された。この知見を日本法中毒学会年会で口頭発表した際、LCニードル洗浄の重要性を指摘され、新たな課題として、検討を続けた。その結果、LCの追加洗浄フェーズに加えて、ニードルの洗浄過程を加える事によって、リン脂質のキャリーオーバーが抑制され、正確なマトリックス効果の評価を行うことが可能となった。これにより、前処理法の正確な比較が可能となり、従来検討していた除タンパク・リン脂質除去カラムであるISOLUTE PLD+に加えて、より効果的なマトリックス効果除去を発揮する簡易化液抽出カラムNovum（Phenomenex）の可能性を見出せた。

本年度は、LC-MS/MS測定時のマトリックス効果評価法を模索した。一般的に、マトリックス効果は米国FDAガイドライン等で定められた、標準液とブランク試料を前処理したマトリックスサンプルに標準物質を同濃度添加した溶液を分析し、得られたMSクロマトグラムの面積を比較する方法で評価されている。しかし、LC-MS/MS分析において、マトリックスを含むサンプルを測定した前後で比較すると、同じ標準物質でも得られるクロマト面積が小さくなり、内部標準による補正もないため、マトリックス効果の評価が正しく行うことができなくなっている事が明らかとなった。これは、リン脂質を始めとするマトリックス効果原因物質のキャリーオーバーが原因と考えらた。そこで、従来のLCグラジエントに加え、リン脂質除去のために追加の洗浄フェーズを設けることで、感度低下が大幅に改善された。この知見を日本法中毒学会年会で口頭発表した際、LCニードル洗浄の重要性を指摘され、新たな課題として、検討を続けた。その結果、LCの追加洗浄フェーズに加えて、ニードルの洗浄過程を加える事によって、リン脂質のキャリーオーバーが抑制され、正確なマトリックス効果の評価を行うことが可能となった。これにより、前処理法の正確な比較が可能となり、従来検討していた除タンパク・リン脂質除去カラムであるISOLUTE PLD+に加えて、より効果的なマトリックス効果除去を発揮する簡易化液抽出カラムNovum（Phenomenex）の可能性を見出せた。