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視床下部神経系の軸索誘導・伸長機序の解明：マウスES細胞器官誘導系における検討

阐明下丘脑神经系统轴突引导和伸长机制：小鼠ES细胞器官引导系统研究

基本信息

批准号：
20K15917
负责人：
河田美穂
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らはマウス ES 細胞から分化誘導した視床下部ニューロンを成体マウス視床下部内に移植すると移植細胞軸索が下垂体後葉まで投射することを明らかにした。先行研究により、反発性ガイダンス因子や細胞接着分子が視床下部の軸索伸長に関与する可能性が示唆されているが、視床下部-下垂体系の軸索ガイダンス機構の詳細は未だ不明な点が多い。そこで本年度は (1) 上記分子群の視床下部-下垂体系における発現を検討した。また、(2) 新規の軸索伸長関連因子を探索する目的で、視床下部室傍核 (PVN)、視索上核 (SON) 領域の RNA-seq を試みた。(1) について胎児脳を用いて検討を行なった。まずバゾプレシン・オキシトシンニューロンの下垂体後葉への軸索伸長時期を免疫染色で確認した。その結果、マウスでは胎生 14 日 (E14)-E16, ラットでは E16-E19 の間に、バゾプレシンニューロン軸索が下垂体後葉へ伸長することが確認された。一方、オキシトシンニューロン軸索は観察されず、出生後の新生児の時期に軸索伸長すると予想された。バゾプレシンニューロンに焦点を当て、軸索伸長関連因子の発現を免疫染色で検討した結果、バゾプレシンニューロン軸索自身や標的部位の下垂体で発現するいくつかの分子を同定した。(2) について、組織が大きいラット脳を用いて PVN, SON 領域の分散を実施した。先行研究を参考にパパインと Accutase による分散を実施した結果、パパインが有効と判断されたが、単細胞レベルまで十分に分散されてはいなかった。そこで、パパインの処理時間を長くした結果、分散度合は高まったが debris も多く出現した。そのため、現行の組織分散プロトコルのさらなる改良が必要であることが明らかとなった。

Applicant らはマウス ES Differentiation induction of cells into the lower part of the optic bed in the lower part of the optic bed in adults. Transplantation of axonal cells into the posterior lobe of the pituitary gland and projection into the lower part of the optic bed. Preliminary study on the relationship and possibility of axonal elongation in the lower part of the retina of the cell-associated molecule and the anti-diabetic factor The details of the mechanism of the lower part of the bed and the drooping system are not clear and the points are many.そこでThis year's は (1) The above-mentioned molecular group's lower part of the bed - sagging system における発appears to be discussed した.また, (2) The purpose of exploring new axonal elongation-related factors, and the RNA-seq test in the field of paraventricular nucleus (PVN) and supraoptic nucleus (SON). (1) について fetal 児脳を Use いて検椒行なった. The axonal elongation period of the posterior pituitary gland and the axonal elongation period of the posterior pituitary gland were confirmed by immunostaining.そのRESULT, マウスではviviparous 14th (E14)-E16, ラットでは E16-E19の间に、バゾプレシンニューロン Axon が Hypophysis posterior lobe へ elongation することが confirm された. On the one hand, the axonal elongation of the axonal axis during the newborn period after birth and the axonal elongation of the axonal axis after birth. The results of immunostaining of バゾプレシンニューロンにfocus and axonal elongation-related factors, The target part of the pituitary gland is the pituitary gland where the axon itself is located. (2) について、organization が大きいラット脳を用いて PVN, SON field のdispersion を実事した. Preliminary research: Referenceにパパインと Accutaseによる dispersed を実时した results, パパインがeffective and judged されたが, 単cell レベルまで十に dispersed されてはいなかった.そこで、パパインのThe processing time is long and the results are high, the dispersion is high and the debris is too much to appear.そのため、The current organizational decentralization is necessary to improve the existing organizational structure.