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視床下部神経系の軸索誘導・伸長機序の解明：マウスES細胞器官誘導系における検討

阐明下丘脑神经系统轴突引导和伸长机制：小鼠ES细胞器官引导系统研究

基本信息

批准号：
20K15917
负责人：
河田美穂
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らはマウス ES 細胞から分化誘導した視床下部ニューロンを成体マウス視床下部内に移植すると移植細胞軸索が下垂体後葉まで投射することを明らかにした。先行研究により、反発性ガイダンス因子や細胞接着分子が視床下部の軸索伸長に関与する可能性が示唆されているが、視床下部-下垂体系の軸索ガイダンス機構の詳細は未だ不明な点が多い。そこで本年度は (1) 上記分子群の視床下部-下垂体系における発現を検討した。また、(2) 新規の軸索伸長関連因子を探索する目的で、視床下部室傍核 (PVN)、視索上核 (SON) 領域の RNA-seq を試みた。(1) について胎児脳を用いて検討を行なった。まずバゾプレシン・オキシトシンニューロンの下垂体後葉への軸索伸長時期を免疫染色で確認した。その結果、マウスでは胎生 14 日 (E14)-E16, ラットでは E16-E19 の間に、バゾプレシンニューロン軸索が下垂体後葉へ伸長することが確認された。一方、オキシトシンニューロン軸索は観察されず、出生後の新生児の時期に軸索伸長すると予想された。バゾプレシンニューロンに焦点を当て、軸索伸長関連因子の発現を免疫染色で検討した結果、バゾプレシンニューロン軸索自身や標的部位の下垂体で発現するいくつかの分子を同定した。(2) について、組織が大きいラット脳を用いて PVN, SON 領域の分散を実施した。先行研究を参考にパパインと Accutase による分散を実施した結果、パパインが有効と判断されたが、単細胞レベルまで十分に分散されてはいなかった。そこで、パパインの処理時間を長くした結果、分散度合は高まったが debris も多く出現した。そのため、現行の組織分散プロトコルのさらなる改良が必要であることが明らかとなった。

The applicant's ES cells are differentiated into the lower part of the optic bed and transplanted into the posterior pituitary gland. In this paper, we first studied the possibility of the relationship between the axonal elongation of the inferior optic bed and the cell adhesion molecules, and the mechanism of the axonal elongation of the inferior optic bed-pendulous system. This year (1) the molecular group listed above is under the lower part of the viewbed-the droop system is under development. (2) To explore the new axonal elongation correlation factors, RNA-seq in PVN and SON domains were tested. (1)In the middle of the day, you'll find out what's going on. The axonal elongation of the posterior pituitary gland was confirmed by immunostaining. The results showed that the fetus was born on the 14th day (E14)-E16, and the axis of the posterior pituitary gland was elongated between E16-E19. The axons were observed at birth, and the axons were elongated at birth. The results of immunostaining for the expression of axon-elongation-related factors and the identification of molecular markers for the expression of axon-elongation-related factors in the pendulous body were analyzed. (2)In addition, the application of PVN, SON domain decentralization is implemented. The first study was conducted on the basis of the results of the study and the results of the study. The results of the study were as follows: The processing time is long, the dispersion is high, and the debis is high. It is necessary to improve the current organizational structure.