視床下部神経系の軸索誘導・伸長機序の解明：マウスES細胞器官誘導系における検討

阐明下丘脑神经系统轴突引导和伸长机制：小鼠ES细胞器官引导系统研究

• 批准号: 20K15917
• 负责人: 河田 美穂
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K15917/
• 关键词: マウス ES 細胞; 視床下部; 下垂体; 軸索伸長; 軸索ガイダンス; バゾプレシン; ES 細胞; 軸索誘導

申請者らはマウス ES 細胞から分化誘導した視床下部ニューロンを成体マウス視床下部内に移植すると移植細胞軸索が下垂体後葉まで投射することを明らかにした。先行研究により、反発性ガイダンス因子や細胞接着分子が視床下部の軸索伸長に関与する可能性が示唆されているが、視床下部-下垂体系の軸索ガイダンス機構の詳細は未だ不明な点が多い。そこで本年度は (1) 上記分子群の視床下部-下垂体系における発現を検討した。また、(2) 新規の軸索伸長関連因子を探索する目的で、視床下部室傍核 (PVN)、視索上核 (SON) 領域の RNA-seq を試みた。(1) について胎児脳を用いて検討を行なった。まずバゾプレシン・オキシトシンニューロンの下垂体後葉への軸索伸長時期を免疫染色で確認した。その結果、マウスでは胎生 14 日 (E14)-E16, ラットでは E16-E19 の間に、バゾプレシンニューロン軸索が下垂体後葉へ伸長することが確認された。一方、オキシトシンニューロン軸索は観察されず、出生後の新生児の時期に軸索伸長すると予想された。バゾプレシンニューロンに焦点を当て、軸索伸長関連因子の発現を免疫染色で検討した結果、バゾプレシンニューロン軸索自身や標的部位の下垂体で発現するいくつかの分子を同定した。(2) について、組織が大きいラット脳を用いて PVN, SON 領域の分散を実施した。先行研究を参考にパパインと Accutase による分散を実施した結果、パパインが有効と判断されたが、単細胞レベルまで十分に分散されてはいなかった。そこで、パパインの処理時間を長くした結果、分散度合は高まったが debris も多く出現した。そのため、現行の組織分散プロトコルのさらなる改良が必要であることが明らかとなった。

Applicants ら は マ ウ ス ES cells か ら induction し た depending on the lower part of the bed ニ ュ ー ロ ン を adult マ ウ ス depending on the bed in the lower に transplantation す る と transplanted cells under the axonal が posterior lobe ま project で す る こ と を Ming ら か に し た. Leading research に よ り, anti 発 ガ イ ダ ン ス factors や cell and molecular が depending on the bed bottom の axon elongation に masato and す が る possibility in stopping さ れ て い る が, depending on the lower part of the bed - sagging system の axon ガ イ ダ ン の detailed は ス is not だ が い more unknown な point. Youdaoplaceholder0 で で this year そ (1) the molecular group mentioned above <s:1> the subbed of the optic bed - ptosis system における shows を検 discussion of た. Youdaoplaceholder0, (2) New regulation: Exploration of the correlation factor of axial cord elongation を する objective: で, <s:1> RNA-seq in the suboptic parietal nucleus (PVN) and supraoptic cord (SON) domains を test みた. (1) に, に, て, て, 児脳を, て検, を, なった. Youdaoplaceholder0 <e:1> · キシトシ キシトシ ニュ ニュ ロ ロ <e:1> を を immunostaining で during the elongation of the posterior pituitary gland へ <s:1> axon confirms た. そ の results, マ ウ ス で は viviparous 14 days (E14) - E16, ラ ッ ト で は E16 - E19 の に, バ ゾ プ レ シ ン ニ ュ ー ロ ン axon が lower posterior lobe へ elongation す る こ と が confirm さ れ た. One party, オ キ シ ト シ ン ニ ュ ー ロ ン axon は 観 examine さ れ ず, after the birth of の where new の period に axon elongation す る と to think さ れ た. バ ゾ プ レ シ ン ニ ュ ー ロ ン に focus を when て, axon elongation masato even factor の 発 を immune dyeing で now beg し 検 た results, バ ゾ プ レ シ ン ニ ュ ー ロ ン axon や target site itself の pituitary で 発 now す る い く つ か を の molecules with fixed し た. (2) に に に に て て, organize が large に ラット脳を ラット脳を, and use <s:1> て PVN in the SON field to <s:1> disperse を and implement た. Leading research を reference に パ パ イ ン と Accutase に よ る scattered を be applied し た results, パ パ イ ン が have sharper と judgment さ れ た が, 単 cell レ ベ ル ま で very scattered に さ れ て は い な か っ た. そ こ で, パ パ イ ン の 処 Richard を long く し た results, high dispersion and は ま っ た が debris も く appear more し た. そ の た め, current の organization scattered プ ロ ト コ ル の さ ら な る improved が necessary で あ る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

マウスES細胞由来視床下部神経の正所性移植と軸索投射の解析

小鼠 ES 细胞来源的下丘脑神经原位移植及轴突投影分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 河田美穂;小谷侑;亀山俊樹;齋藤加奈子;中島昭;長崎弘
• 通讯作者: 長崎弘

同種移植したマウス ES 細胞由来視床下部神経の軸索投射様式の解析

同种异体小鼠 ES 细胞来源的下丘脑神经轴突投射模式分析

• 发表时间: 2020
• 作者: 河田美穂;小谷 侑;亀山俊樹;齋藤加奈子;中島 昭;長崎 弘
• 通讯作者: 長崎 弘

同種移植されたマウス ES 細胞由来視床下部神経は下垂体後葉に軸索投射する

来自同种异体移植小鼠 ES 细胞的下丘脑神经将轴突投射到垂体后叶。

• 发表时间: 2020
• 作者: 河田美穂;小谷 侑;亀山俊樹;中島 昭;長崎 弘
• 通讯作者: 長崎 弘