Establishment of an animal model for evaluating intracellular energy-interaction between cancer and immune cells

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本研究の目的は、血球系がん化細胞（BCR-ABL遺伝子を導入）を用いて、がん化細胞と免疫系細胞のエネルギー代謝及び免疫寛容の状態変化を同時に評価し、両者の相互作用を検討し得る「血液がんマウスモデル」を構築することである。本研究では、①免疫機能を維持した状態でがん進行度を可視化できる血液がんマウスモデルの構築、及び②本モデルを用いたがん化細胞及び免疫系細胞のエネルギー・インタラクション評価の検証に挑戦している。本年度は、In Vivo Imaging System（IVIS）の使用が不可能なったため、マウスの生存を維持した状態でのin vitro luciferase assayの構築を試みた。アニマルランセットを使用することで経時的に少量の血液サンプルを採取することに成功し、プレートリーダーを用いたがんの進行度をモニタリングできる評価系を構築した。本評価系によってBCR-ABLチロシンキナーゼ阻害剤の薬効評価が可能であることも確認済みである。細胞内エネルギー代謝の評価方法として、Western blottingによる解糖系およびTCA回路関連酵素の発現量、ミトコンドリア複合体の発現量の検討を行った。In vitroにおいて、血球系がん化細胞に対するBCR-ABLチロシンキナーゼ阻害剤の曝露において、解糖系酵素の発現量減少は確認されたが、TCA回路関連酵素やミトコンドリア複合体の発現量に変化はなかった。現在、TCA回路の律速酵素であるIDH活性およびミトコンドリア複合体活性の評価に挑戦してる。免疫細胞へのアプローチとして、磁気ビーズを用いたT細胞の単離に挑戦している。今後は、単離したT細胞のエネルギー代謝状態をWestern blottingや酵素活性試験を用いて、免疫状態をフローサイトメトリーやELISAで検討する予定である。