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Na輸送体を効果的に解析可能な腎尿細管3次元培養モデルによる高血圧発症機序の解明

使用可有效分析Na转运蛋白的肾小管3D培养模型阐明高血压发生的机制

基本信息

批准号：
20K17252
负责人：
水口建
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの研究でHK-2細胞を3次元培養することによりヒト近位尿細管の実験モデルを確立するという目標を達成することができた。その過程でHK-2細胞の3次元培養モデルでは2次元培養モデルと比較してNa輸送能が活性化していることが判り、Na/アミノ酸輸送体であるSLC6A15がその一部を担っているのではないかというヒントを得ることができた。2022年度では、この点をさらに深く調べるためにSLC6A15に対してRNA干渉の実験を開始した。その結果、2D培養したHK-2細胞に対しては良好なノックダウン効率を得ることができたが、3D培養したHK-2細胞では十分なノックダウン効率を得られないことが判った。そこで3D培養に対するRNA干渉を実施するため、トランスフェクション方法やsiRNA濃度などの条件検討に時間を要している。一方、2022年度では本実験モデルを他の研究に活かすことはできないかと考えて、虚血再灌流障害モデルとしての使用可能性について検討した。その結果、2Dならびに3D培養したHK-2細胞では、低酸素環境下で培養することによりHIF-1αの発現を免疫蛍光染色やウェスタンブロット法で確認できた。また、通常酸素環境下に戻すことにより細胞死が起きることも確認することができた。興味深いことに3D培養では2D培養と比較して虚血再灌流後の細胞死が少ない傾向が認められ、低酸素ストレスに対して防御機構が新たに存在する可能性が考えられた。

In the study of HK-2 cells, three times of culture, the proximal urine tube, urine tube and urine tube. Through the HK-2 process, three-dimensional training, two-dimensional training, and two-dimensional training, compared with the Na, you can make a decision by activating the SLC6A15, and the Na/ transporter is responsible for the overall performance of the system. In the year 2022, we will start the first round of SLC6A15 training in the first half of the year. The RNA will begin. The results showed that the results of 2D HK-2 cell culture and 3D culture of HK-2 cells showed good results and good results, while those of 3D culture showed good results. In 3D, you need to use the RNA system to do this, and you need to use the siRNA method to determine the conditions and conditions. On the one hand, in the year 2022, there was a study on the possibility of use of blood deficiency and reperfusion. The results of the experiment, the results of 2D and 3D culture of HK-2 cells and the detection of HIF-1 α in the environment of low acid content showed that the DNA was confirmed by immuno-light staining and immunoassay. In the acid environment, it is usually necessary to make sure that the cells are dead in the acid environment. There are fewer cell death rates in 3D culture and 2D culture than in blood deficiency and reperfusion, and there is a possibility that there is a possibility of cell death in the defense mechanism.