Na輸送体を効果的に解析可能な腎尿細管3次元培養モデルによる高血圧発症機序の解明

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これまでの研究でHK-2細胞を3次元培養することによりヒト近位尿細管の実験モデルを確立するという目標を達成することができた。その過程でHK-2細胞の3次元培養モデルでは2次元培養モデルと比較してNa輸送能が活性化していることが判り、Na/アミノ酸輸送体であるSLC6A15がその一部を担っているのではないかというヒントを得ることができた。2022年度では、この点をさらに深く調べるためにSLC6A15に対してRNA干渉の実験を開始した。その結果、2D培養したHK-2細胞に対しては良好なノックダウン効率を得ることができたが、3D培養したHK-2細胞では十分なノックダウン効率を得られないことが判った。そこで3D培養に対するRNA干渉を実施するため、トランスフェクション方法やsiRNA濃度などの条件検討に時間を要している。一方、2022年度では本実験モデルを他の研究に活かすことはできないかと考えて、虚血再灌流障害モデルとしての使用可能性について検討した。その結果、2Dならびに3D培養したHK-2細胞では、低酸素環境下で培養することによりHIF-1αの発現を免疫蛍光染色やウェスタンブロット法で確認できた。また、通常酸素環境下に戻すことにより細胞死が起きることも確認することができた。興味深いことに3D培養では2D培養と比較して虚血再灌流後の細胞死が少ない傾向が認められ、低酸素ストレスに対して防御機構が新たに存在する可能性が考えられた。