4-methylumbelliferoneと抗癌剤の併用による新規癌治療

使用 4-甲基伞形酮和抗癌药物组合的新型癌症治疗

基本信息

批准号：
20K17671
负责人：
吉田枝里
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

胃癌細胞KATO-Ⅲ、OCUM-1を培養し、遠心のうえ細胞ペレットを収集。ライシスバッファー処理後の上清を検体とした。ウエスタンブロットにてPD-L1の発現を検出した。また、細胞をホルムアルデヒド固定ののち、PBS処理した細胞ペレットを使用しフローサイトメトリーを行った。他、胃癌細胞を培養し、ヒアルロン酸の定量、細胞外マトリックスの可視化を行った。MU処理後の細胞は、ヒアルロン酸結合タンパクを用いた免疫染色でヒアルロン酸を可視化した。ヒアルロン酸結合タンパクを用いたELISA法で細胞層ヒアルロン酸量定量を行った。MUの細胞増殖抑制効果は血球計算板を用いて培養細胞数を計測することで検討した。胃癌細胞は両株にてPD-L1の発現を認めた。MU処理により胃癌細胞はHA量の減少、細胞外マトリックスの可視領域の減少が認められた。MU処理した細胞でのPD-L1発現の減少を認めた。血漿からゾレドロネートおよびインターロイキン-2で刺激されたγδT細胞に富む末梢血単核細胞（PBMC）を抽出し、細胞増殖をMU存在下で検討した。MU存在下ではPBMCの細胞毒性が増強した。T 細胞機能は、フローサイトメトリーと乳酸脱水素酵素アッセイによって分析した。MU存在下で、T細胞機能の増強を認めた。

培养胃癌细胞Kato-III和OCUM-1，并离心以收集细胞颗粒。裂解缓冲液处理后的上清液用作标本。通过蛋白质印迹检测到Pd-L1的表达。此外，在细胞固定在甲醛上后，使用经PBS处理的细胞颗粒进行流式细胞仪。将其他胃癌细胞培养以定量透明质酸并可视化细胞外基质。 MU处理后，使用透明质酸结合蛋白进行免疫染色后将透明质酸观察到细胞中。 ELISA使用透明质酸结合蛋白对细胞层中透明质酸的定量定量。通过使用血细胞计测量培养物中细胞的数量研究了MU抑制细胞生长的作用。胃癌细胞在两种菌株中均显示出PD-L1的表达。 MU治疗显示胃癌细胞中HA量的减少，细胞外基质的可见区域降低。在MU处理的细胞中观察到PD-L1表达的降低。从血浆中提取富含用唑来膦酸盐和白介素2刺激的γδT细胞中的富含γδT细胞的外周血单核细胞（PBMC），研究了在MU存在下细胞增殖。在MU存在下，PBMC的细胞毒性得到了增强。通过流式细胞术和乳酸脱氢酶测定法分析T细胞功能。在存在MU的情况下，观察到T细胞功能增强。