血管新生能を有する骨髄間葉系前駆細胞を用いた血管新生療法の開発

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我々の研究では，好塩基性線維芽細胞増殖因子(basic fibroblast growth factor: bFGF)を投与したラット皮膚創部ではCD34とProcollagen1を共発現するFibrocyteが同定された。このCD34+/Procollagen1+ fibrocyte (CPF)は管腔構造を形成するので新生毛細血管の形成に関与すると考えられた。よってbFGF投与創部ではCPF発現誘導による血管新生メカニズムが示唆された。本研究ではbFGF誘導性のCPFによる血管新生能を検証するため，bFGF投与による肉芽組織をコラーゲンゲルに移植しFibrocyteの発現性や血管新生能についてin vitro培養系で検討した。また，近年FibrocyteのマーカーであるCXCL12/CXCR4ケモカインの関与についても検討した。手法としてはSDラット背部皮膚に全層性潰瘍を作成し， bFGF投与後に肉芽組織細胞を抽出し，コラーゲンゲル培地にて三次元回旋培養を行った。その結果、コラーゲンゲル内に増殖したFibrocyteは，bFGF投与群ではコントロール群に比して有意な管腔様構造が形成された。この過程でbFGF投与群においてCD34の有意な発現増加がRT-PCR解析から確認された。このことはbFGFによるCD34+ fibrocyte発現誘導による血管形成メカニズムを示唆した。Fibrocyteに発現するCXCR4はCXCR4のligandであるCXCL12の刺激によりFibrocyteの集簇に関与することが示唆されている。そこでbFGF投与による肉芽組織における血管新生性CPFの誘導におけるCXCL12/CXCR4の関与を検討した。CXCL12/CXCR4の発現性も検討するとbFGF投与群でのCXCL12/CXCR4の有意に増加が確認された。そこでbFGF投与肉芽組織にCXCL12 アンタゴニストであるAMD3100を投与したところ投与群では非投与群に比べてCFPの有意な減少が確認された。よってbFGFによるCD34+ fibrocyte発現誘導による血管形成メカニズムにCXCL12/CXCR4の関与が強く示唆された。