抗炎症性マクロファージと間葉系幹細胞を併用した歯周病関連アテローム硬化症治療戦略

利用抗炎巨噬细胞和间充质干细胞联合治疗牙周病相关动脉粥样硬化的策略

• 批准号: 20K18514
• 负责人: 滝沢 尚希
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18514/
• 关键词: m2マクロファージ; MSC; M2-MΦ; M2マクロファージ; 間葉系幹細胞; 抗炎症性マクロファージ

我々はこれまでに、マウス骨髄をある条件下で培養するとMSCとM2-Mφが同時に増殖・培養されること、またこの培養系ではM2-Mφ前駆細胞の増殖促進とM2化の誘導にはMSC由来のM-CSFやMSCの接着因子が関わっていることを明らかにした。一方、マウス末梢血を採取し、M2-MΦ前駆細胞を増殖させるM-CSFを加え通法(37°C, 5% CO2)で長期培養したところ、M2-MΦが誘導されることを見出した。そこで本研究ではまず初めに、末梢血由来血球系細胞を用いたM2-MΦの大量培養法を確立するために、様々な条件下でMSCを用いる培養と比較検討した。令和3年度は、末梢血とMSCの接着共培養系、トランスウェルによる末梢血とMSCの非接着共培養系、末梢血にM-CSFのみを添加した培養系の3条件を設定し、M2-MΦ分化・増殖能を比較検討した。その結果、末梢血にM-CSFを単独作用する条件下で、その他の培養系とほぼ同等のM2-MΦ分化・増殖能を示した。また、M2-MφのM2極性維持機構については、現在、NIH-3T3細胞（対照）とMSCそれぞれの細胞とM2-Mφとの共培養での評価のための培養条件の検討を行なっている。令和4年度には、末梢血にM-CSFを作用し生成したM2-MΦを、継続してM-CSF存在下で単独培養、MSCとの接着共培養、NIH3T3細胞との接着共培養を行いマーカー発現を比較検討した。その結果、M-CSF単独培養とMSC接着共培養系では同程度のCD206発現を示したが、NIH3T3共培養系ではCD206発現は有意に減少した。このことは、MSCが炎症部位でM2-MΦのニッチとなり抗炎症機能を長期に維持することを示唆した。このMSCに特異的なMΦのM2維持機能を利用したMSC細胞治療法は、歯周病菌により増悪が予想されるアテローム硬化の進行を抑制する新たな細胞治療開発の一助となると考えられる。

我们先前曾透露，当小鼠骨髓在某些条件下培养时，MSC和M2Mφ同时生长和培养，并且在该培养系统中，MSC衍生的M-CSF和MSC粘附因子涉及促进M2-Mφ祖细胞的增殖，并诱导M2-MφProtorsor细胞的增殖。另一方面，使用M-CSF收集小鼠的外周血并长时间培养，该方法允许使用一种方法（37°C，5％CO2）增殖M2-Mφ祖细胞，并发现诱导M2-Mφ。因此，在这项研究中，我们首先使用外周血衍生的血细胞与在各种条件下使用MSC进行培养进行了比较并检查了大量培养M2-Mφ的方法。在2021财年中，设定了三个条件：外周血和MSC的粘附共培养系统，使用Transwells的外周血和MSC的非粘附共培养系统，以及单独将M-CSF添加到外周血中的培养系统，以及M2-M的比较研究。结果，在单独使用M-CSF的条件下，用于外周血，M2-Mφ分化和增殖能力几乎与其他培养系统的功能相同。此外，关于M2-MφM2极性维持的机制，我们目前正在共同培养中检查NIH-3T3细胞（对照），MSC细胞和M2-Mφ的培养条件。在2022年，通过使用M-CSF作用在外周血上产生的M2-Mφ在存在M-CSF的情况下连续培养，并与MSC共同培养，并与NIH3T3细胞共同培养以比较标记物表达。结果，单独的M-CSF和MSC粘附系统中的CD206表达相似，但是在NIH3T3共培养系统中，CD206的表达显着降低。这表明MSC在炎症部位成为M2-Mφ的利基市场，并长期保持抗炎功能。该MSC细胞疗法使用M2的M2维护功能（特定于MSC）被认为有助于开发新的细胞疗法，从而抑制动脉粥样硬化的进展，该疗法预计会由于牙周疾病细菌而加剧。

项目成果

細胞治療応用を目的としたマウス末梢血から抗炎症性マクロファージを効率的に調製する条件の検討

检查从小鼠外周血中有效制备抗炎巨噬细胞用于细胞治疗应用的条件

• 发表时间: 2021
• 作者: 滝沢 尚希;鈴木 啓太;村井 治;佐々木 大輔;客本 齊子;石崎 明;八重柏 隆
• 通讯作者: 八重柏 隆

歯周治療応用を目的とした末梢血からの抗炎症性マクロファージの効率的な大量調整法の検討

外周血抗炎巨噬细胞有效质量调节方法在牙周治疗中的应用研究

• 发表时间: 2020
• 作者: 滝沢 尚希;鈴木 啓太;村井 治;佐々木 大輔;客本 齊子;石崎 明;八重柏 隆
• 通讯作者: 八重柏 隆