抗炎症性マクロファージと間葉系幹細胞を併用した歯周病関連アテローム硬化症治療戦略

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我々はこれまでに、マウス骨髄をある条件下で培養するとMSCとM2-Mφが同時に増殖・培養されること、またこの培養系ではM2-Mφ前駆細胞の増殖促進とM2化の誘導にはMSC由来のM-CSFやMSCの接着因子が関わっていることを明らかにした。一方、マウス末梢血を採取し、M2-MΦ前駆細胞を増殖させるM-CSFを加え通法(37°C, 5% CO2)で長期培養したところ、M2-MΦが誘導されることを見出した。そこで本研究ではまず初めに、末梢血由来血球系細胞を用いたM2-MΦの大量培養法を確立するために、様々な条件下でMSCを用いる培養と比較検討した。令和3年度は、末梢血とMSCの接着共培養系、トランスウェルによる末梢血とMSCの非接着共培養系、末梢血にM-CSFのみを添加した培養系の3条件を設定し、M2-MΦ分化・増殖能を比較検討した。その結果、末梢血にM-CSFを単独作用する条件下で、その他の培養系とほぼ同等のM2-MΦ分化・増殖能を示した。また、M2-MφのM2極性維持機構については、現在、NIH-3T3細胞（対照）とMSCそれぞれの細胞とM2-Mφとの共培養での評価のための培養条件の検討を行なっている。令和4年度には、末梢血にM-CSFを作用し生成したM2-MΦを、継続してM-CSF存在下で単独培養、MSCとの接着共培養、NIH3T3細胞との接着共培養を行いマーカー発現を比較検討した。その結果、M-CSF単独培養とMSC接着共培養系では同程度のCD206発現を示したが、NIH3T3共培養系ではCD206発現は有意に減少した。このことは、MSCが炎症部位でM2-MΦのニッチとなり抗炎症機能を長期に維持することを示唆した。このMSCに特異的なMΦのM2維持機能を利用したMSC細胞治療法は、歯周病菌により増悪が予想されるアテローム硬化の進行を抑制する新たな細胞治療開発の一助となると考えられる。