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Development of a highly sensitive sex determination method using the novel primer set

使用新型引物组开发高灵敏度性别测定方法

基本信息

批准号：
20K18803
负责人：
藤本佳那
金额：
$ 2.66万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18803/
关键词：
性別判定 Amelogenin DNA Exon amelogenin human gene

项目摘要

身元不明遺体における個人識別や自然人類学における古人骨の鑑定では、性別判定は重要な鑑定事項である。特に、DNA解析による性別判定は、形態人類学的特徴を利用できない試料にも適用でき、有用性が高い。法医DNA型鑑定で取り扱う試料は環境要因や微生物の影響をうけ容易に分解されるため、高度に変性した微量な試料から正確に判定を行うことが求められている。従来の報告では、主にアメロゲニン遺伝子のIntron領域の男女差を用いた判定が行われている。しかし、この領域は多型性が非常に高く、判定領域の遺伝子変異によって正確な判定が行えない事例が存在する。DNA鑑定による性別判定を確実なものとするためには、男女差以外の多型が可能な限り少ない座位を用いる必要がある。そこで、ヒトアメロゲニン遺伝子のExon領域の全長配列について、BLAST：Basic Local Alignment Search Toolを用いた塩基配列の相同性検索を行った。その結果、遺伝的保存性の高いExon 1領域に着目して、性別判定用プライマーセットを開発した。現在広く法医DNA型鑑定に用いられているGlobalFiler PCR Amplification Kit (GF)との比較を行い、正確な性別判定を安定しておこなうために必要なDNA量を検討する。そして、高度に断片化した古人骨試料を用いて本法とGFを用いて、比較実験を行い本法の有用性を検討する。本法はPCR産物の鎖長が短く、高度断片化試料についても適用可能、かつ手技が簡便で迅速、安価であり、法医学及び自然人類学に貢献できると考える。

Identification of the remains of unidentified individuals, identification of ancient bones, identification of gender, identification of important matters Characteristics, DNA analysis, gender determination, morphological anthropological characteristics, use, applicability and usefulness of samples Forensic DNA typing is based on environmental factors and microbial influences. It is easy to decompose and highly sensitive to trace samples. In the report, the main reason for this is that the difference between men and women in the field of Intron is determined. The diversity of the domain is very high, and the diversity of the domain is determined correctly. DNA identification can be done without discrimination, and polytypes other than male and female differences can be used without discrimination. BLAST: Basic Local Alignment Search Tool is used to search for identity of base alignment. The results of the study, the preservation of genetic information, and the development of the field of gender determination The GlobalFiler PCR Amplification Kit (GF) is now used in forensic DNA typing to compare and determine the amount of DNA necessary for accurate sex determination. The usefulness of this method is discussed in the application of highly fragmented bone samples. This method is suitable for PCR products with short length, highly fragmented samples, simple and rapid manual techniques, and contributions to forensic science and natural anthropology.