RNAポリメラーゼIIのDNA二本鎖切断修復機構への関与の解明

阐明RNA聚合酶II参与DNA双链断裂修复机制

• 批准号: 20K19968
• 负责人: 磯野 真由
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K19968/
• 关键词: RNAポリメラーゼⅡ; DNA二本鎖切断修復; ユビキチン化; RNAポリメラーゼ; DNA二本鎖切断; 転写; DNA修復

DNA修復機構やDNA損傷応答の異常はゲノム不安定化に起因する。これまでに、真核生物における転写領域でのRNAポリメラーゼII（Pol II）の停滞はゲノム不安定性に関与することが報告されている。また、Pol IIが内因性のDNA二本鎖切断（DSB）の誘発に関与することも報告されている。しかし、転写領域でのPol IIとDSB修復との関係性について、詳細は明らかになっていない。本研究では、転写領域のDSB修復に対するPol IIの関与について明らかにすることを目的とした。まず、DSB修復関連タンパク質とPol IIとの相互作用について検討を行った。カンプトテシン（CPT）処理後の細胞を用いて、Pol II抗体による免疫沈降（IP）を行い、DSB修復関連タンパク質抗体の検出を試みた。その結果、幾つかのDSB修復関連タンパク質がPol IIと相互作用することを確認した。また、既報の転写共役型修復時に見られるPol IIのユビキチン化が、今回の状況でも生じるのか、上記IPを行い、Pol IIのバンドシフトを指標に検討した。CPT処理によって、Pol IIのバンドシフトが検出された。また、ユビキチン抗体を検出する実験からも、損傷依存的にPol IIのユビキチン化が起こることを明らかにした。さらに、相互作用に関与するユビキチンリガーゼの同定を試みた。ユビキチンリガーゼの発現抑制または欠損細胞を作成し、上記のIPを行った。その結果、あるユビキチンリガーゼの発現抑制または欠損により、Pol IIのユビキチン化の抑制、並びにPol IIとDSB修復関連タンパク質との相互作用の低下を確認した。以上の結果から、転写領域におけるDSB修復にはPol IIが関与しており、Pol IIのユビキチン化を介してDSB修復タンパク質が動員されることを示唆した。（未発表の為、タンパク質名は伏せた。）

DNA repair agency やDNA damage 応 answer <s:1> abnormality ゲノム ゲノム instability に cause する. こ れ ま で に, eukaryotes に お け る planning write field で の RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II (Pol II) stagnant の は ゲ ノ ム labile に masato and す る こ と が report さ れ て い る. Youdaoplaceholder0, Pol IIが endogenous <s:1> DNA double lock cutting (DSB) <s:1> induction に and する する と と されて report されて る る. し か し, planning to write で の Pol II と DSB repair と の masato is sexual に つ い て, detailed は Ming ら か に な っ て い な い. This study で は, planning to write の DSB repair に す seaborne る Pol II の masato and に つ い て Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. ま ず, DSB repair masato even タ ン パ ク qualitative と Pol II と の interaction に つ い て 検 line for を っ た. カ ン プ ト テ シ ン (CPT) after 処 manage を の cells use い て, Pol II antibody に よ る immune sink (IP) を い, DSB repair masato even タ ン パ ク qualitative antibody の 検 try out を み た. Youdaoplaceholder0 そ results, several DSB repair associations タ パ パ duroid がPol IIと interactions する する とを confirm た た. ま た, both reported の type planning to write a total service repair に see ら れ る Pol II の ユ ビ キ チ ン が, today back to の condition で も raw じ る の か, line written IP を い, Pol II の バ ン ド シ フ ト を index に beg し 検 た. CPT handles によって, Pol II バ ドシフトが検 ドシフトが検 された. ま た, ユ ビ キ チ ン antibody を 検 out す る be 験 か ら も, damage dependent に Pol II の ユ ビ キ チ ン change が up こ る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0, the interaction に relation is the same as that of するユビキチ リガ リガ ゼ ゼ を みた. Youdaoplaceholder0 ユビキチ リガ ゼ ゼ ゼ ユビキチ inhibits また ゼ damaged cells を to form a を, superscript a を IPを row った. そ の results, あ る ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ の 発 now inhibit ま た は owe loss に よ り, Pol II の ユ ビ キ チ ン の inhibition, and び に Pol II と DSB repair masato even タ ン パ ク qualitative と の low interaction の を confirm し た. の above results か ら, planning to write に お け る DSB repair に は Pol II が masato and し て お り, Pol II の ユ ビ キ チ ン change を interface し て DSB repair タ ン パ ク mass mobilization が さ れ る こ と を in stopping し た. (Not shown on the surface is, タ タ パ パ パ <s:1> mass name タ fu せた.)