Development of a fluorescent GABA probe for analysis of pathological mechanism in autism spectrum disorder

开发用于分析自闭症谱系障碍病理机制的荧光 GABA 探针

• 批准号: 20K22699
• 负责人: 瀧川 健司
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital and Institute of Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22699/
• 关键词: GABA; 蛍光プローブ; 自閉症スペクトラム障害; イメージング

本研究課題では、自閉症病態において抑制性シナプス前部のGABA放出機能にどのような変化が生じているのかを調べるために、神経細胞のシナプス前部から開口放出されるGABAを計測するGABA蛍光イメージング技術の確立を目指している。本年度は、本研究課題で開発したGABA蛍光プローブを細胞膜上にストレプトアビジン-ビオチンを介して固定することで、培養神経細胞や脳スライス標本において抑制性シナプスから細胞外に放出されるGABAを定量的に計測する手法の構築を試みた。この手法では、GABA蛍光プローブをビオチン化し、ストレプトアビジンと混合することでストレプトアビジンとGABA蛍光プローブの複合体を形成させ、ビオチン化した神経組織に複合体を添加することでGABA蛍光プローブを細胞膜上に固定する。ストレプトアビジン1分子あたりのGABA蛍光プローブの分子数を最大にし、GABA蛍光プローブを効率よく細胞膜上に固定するために、ストレプトアビジンとGABA蛍光プローブの混合比の異なる複数種類の複合体を、ビオチン化した非神経細胞の標本に個別に添加後、各細胞標本を蛍光顕微鏡で撮影し、蛍光画像の輝度値を比較した。その結果、細胞膜を最も明るく染色できる混合比を決定することができた。さらに、細胞膜上に固定したGABA蛍光プローブの性能を評価するために、GABA蛍光プローブを固定した細胞標本にGABAの終濃度が1 mM以上となるように高濃度のGABAを添加した。その結果、GABAの添加前後で蛍光強度が増加した。これらの結果から、GABA蛍光プローブは、細胞膜上に固定された環境下においてもGABAに対する応答性が維持されていることが明らかとなった。

In this study, the symptoms of the disease, the suppression of the disease, the suppression of the disease, the release of the GABA in the front part of the system, the release of the GABA in the front part of the control system, the release of the device, the symptom of the disease, the suppression of the symptoms, the release of the GABA in the front part of the system, and the opening of the front door of the device. This year and this year, the project of this year is to conduct a series of experiments on the cell membrane of GABA. In this study, we have conducted a series of tests on the membrane of the cell membrane, which is used to fix the cell membrane. This inhibitory assay is used to detect the amount of GABA in the cytosol. The manipulation, the GABA, the GABA, the chemical, the mixed, the GABA, the complex, the complex, the membrane, the tissue, the membrane, the membrane. The maximum number of molecules, the maximum number of GABA molecules, the maximum number of molecules, the highest molecular weight, the highest The portrait of light is different from that of light portrait. The results of the experiment, the membrane of the cell membrane, the most obvious staining and the mixing ratio of the cell membrane determined the concentration of the cell membrane. Fixed on the cell membrane, GABA Light, performance, GABA Light, Fixation, Fixation, GABA, GABA, 1 mM or more. The results show that the light intensity increases before and after the addition of GABA. The results of the experiment, the GABA photoluminescence assay, the cell membrane immobilization of the cell membrane and the response of the GABA in the environment were analyzed in this paper.

项目成果

Real-time in vivo imaging of extracellular ATP in the brain with a hybrid-type fluorescent sensor

• DOI: 10.7554/elife.57544
• 发表时间: 2020-07-10
• 期刊: ELIFE
• 影响因子: 7.7
• 作者: Kitajima, Nami;Takikawa, Kenji;Hirose, Kenzo
• 通讯作者: Hirose, Kenzo