中枢神経系におけるD-セリンの時空間動態の可視化解析

中枢神经系统 D-丝氨酸时空动态的可视化分析

• 批准号: 11J05563
• 负责人: 瀧川 健司
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J05563/
• 关键词: D-セリン; センサー; 可視化

本研究では、D-セリンのシナプス近傍での時空間パターンが神経機能を特徴づける重要な因子であるとの視点に立ち、脳内D-セリンの動態を高い時空間解像度で可視化解析を実現する蛍光性D-セリンセンサーを開発し、D-セリンイメージング技術の確立を目指す。当該年度においては、申請者が構築した蛍光性センサーのハイスループット作製系を活用することでD-セリンセンサーの候補となる蛍光複合体の選抜および有望な蛍光複合体のD-セリンに対する応答性を評価した。高精細・高感度なイメージングを実現する上でダイナミックレンジの大きい蛍光性センサーを開発することが望ましいため、ハイスループット作製系で作製した数百種類の蛍光複合体に対してD-セリン投与によって惹起される蛍光強度変化を指標にスクリーニングを行った。その結果、D-セリン投与によって10%以上の蛍光強度変化率を示した蛍光複合体をOregon Green標識体から5種類、Alexa Fluor 488標識体から6種類、Cy3標識体から10種類取得することに成功した。これらの内、Alexa Fluor 488標識体の一つは最大で約35%という大きな蛍光強度変化率を示した。続いて、神経あるいはグリア細胞から放出され拡散していくD-セリンをリアルタイムに捕らえる上でD-セリンに対する適切な親和性を持つ蛍光性センサーを開発することが必要であるため、スクリーニングで選抜した有望な蛍光複合体のD-セリンに対する親和性を評価した。その結果、期待に反して蛍光複合体のD-セリンに対する親和性は低く、D-セリンイメージングが困難であると予想される性質を示した。現在、蛍光複合体にアミノ酸変異を加えることでD-セリンに対する親和性の改善に努めている。

This study で は, D - セ リ ン の シ ナ プ ス nearly alongside で spatial パ の タ ー ン が 経 function を god's 徴 づ け る important factor な で あ る と の viewpoints に ち, D - within 脳 セ リ ン の dynamic を high spatial resolution い で visualization analytical を be presently す る 蛍 optical D - セ リ ン セ ン サ ー を open 発 し, D - セ リ ン イ メ ー ジ ン グ technology の establish を refers Youdaoplaceholder0. When the annual に お い て は, applicants が build し た 蛍 optical セ ン サ ー の ハ イ ス ル ー プ ッ ト cropping system を use す る こ と で D - セ リ ン セ ン サ ー の alternate と な る 蛍 light complex の choose sorting お よ び could な 蛍 light complex の D - セ リ ン に す seaborne る 応 a sexual を review 価 し た. High degree of fine · Gao Gan な イ メ ー ジ ン グ を be presently す る on で ダ イ ナ ミ ッ ク レ ン ジ の big き い 蛍 optical セ ン サ ー を open 発 す る こ と が hope ま し い た め, ハ イ ス ル ー プ ッ で makes the ト cropping system し た hundreds kinds の 蛍 light complex に し seaborne て D - セ リ ン cast with に よ っ て provoked さ れ る 蛍 light intensity variations change を index に ス ク リ ー ニ ン グ を Line った. そ の results, D - セ リ ン cast with に よ っ て 10% の 蛍 light intensity variations change rate を shown し た 蛍 light complex を Oregon Green logo body か ら 5 kinds, Alexa Fluor 488 logo body か ら 6 kinds, Cy3 logo か ら 10 kinds す る こ と に successful し た. こ れ ら の body の, Fluor Alexa 488 marks a つ は で largest about 35% と い う big き な 蛍 light intensity variations change rate を shown し た. 続 い て, god 経 あ る い は グ リ ア cells か ら release さ れ company, scattered し て い く D - セ リ ン を リ ア ル タ イ ム に catching ら え る で on D - セ リ ン に す seaborne る appropriate な affinity を hold つ 蛍 optical セ ン サ ー を open 発 す る こ と が necessary で あ る た め, ス ク リ ー ニ ン グ で optional sorting し た could な 蛍 light complex の D - セ リ ン に す seaborne る affinity Youdaoplaceholder0 comments 価 た. そ の results, expect に し て 蛍 light complex の D - セ リ ン に す seaborne る affinity は low く, D - セ リ ン イ メ ー ジ ン グ が difficult で あ る と to think さ れ る nature を shown し た. Now, 蛍 light composite に ア ミ ノ acid - different を plus え る こ と で D - セ リ ン に す seaborne る affinity の improve に Mr め て い る.

项目成果

Acidic-pH-Activatable Fluorescence Probes for Visualizing Exocytosis Dynamics

• DOI: 10.1002/anie.201402030
• 发表时间: 2014-06-01
• 期刊: ANGEWANDTE CHEMIE-INTERNATIONAL EDITION
• 影响因子: 16.6
• 作者: Asanuma, Daisuke;Takaoka, Yousuke;Hirose, Kenzo
• 通讯作者: Hirose, Kenzo

シナプス伝達を可視化する蛍光性グルタミン酸センサーの開発

开发荧光谷氨酸传感器以可视化突触传递

• 发表时间: 2014
• 作者: 瀧川 健司;並木 繁行;坂本 寛和;有吉 哲郎;金原 直也;浅沼 大祐;廣瀬 謙造
• 通讯作者: 廣瀬 謙造

シナプス伝達を可視化する高性能グルタミン酸センサーの開発

开发高性能谷氨酸传感器以可视化突触传递

• 发表时间: 2013
• 作者: 瀧川 健司;並木 繁行;坂本 寛和;有吉 哲郎;金原 直也;浅沼 大祐;廣瀬 謙造
• 通讯作者: 廣瀬 謙造

蛍光イメージングプローブのハイスループット作製技術の開発

荧光成像探针高通量生产技术开发

• 发表时间: 2012
• 作者: 瀧川 健司;並木 繁行;坂本 寛和;有吉 哲郎;金原 直也;浅沼 大祐;廣瀬 謙造;瀧川 健司;瀧川 健司
• 通讯作者: 瀧川 健司

蛍光性バイオセンサーの効率的作製法の開発

开发生产荧光生物传感器的有效方法

• 发表时间: 2012
• 作者: 瀧川 健司;並木 繁行;坂本 寛和;有吉 哲郎;金原 直也;浅沼 大祐;廣瀬 謙造;瀧川 健司;瀧川 健司;瀧川健司
• 通讯作者: 瀧川健司