Activation of microglia by lipid metabolites and inhibitory effect by natural nuclear receptor agonists

脂质代谢物对小胶质细胞的激活和天然核受体激动剂的抑制作用

• 批准号: 20K22728
• 负责人: 篠田 知恵
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22728/
• 关键词: 脂質代謝の変調; アルツハイマー病; ミクログリア; 核内受容体; 炎症; 脂肪酸; プレクリニカル; 脂質代謝

脂質異常症はアルツハイマー症（AD）発症の危険因子である。「脂質代謝の変調」による「ミクログリアの活性化」がAD発症に先駆するのではないかと考えた。ミクログリア細胞株としてBV2細胞を用い、「脂質代謝の変調」としてパルミチン酸（PA）200 μMを用いたところ炎症性サイトカインのmRNA発現の上昇がみとめられた。RXRアゴニストであるBexarotene（BEX）をPA と同時に添加したところ、PA によるTnfα mRNA 発現の増加が抑制された。この効果を検証する為にRXRアンタゴニストHX531を用いたところ、BEX によるTnfα mRNA 発現抑制効果が消失したことから、PA 誘導による炎症反応や小胞体ストレスは、RXRを介して抑制されると考えられた。本年はそのRXRを介した抗炎症効果を更に詳しく検証する為に、アンタゴニストとしてPA452とUVI3003を用いるだけでなく、RXRα KD細胞の樹立も試みた。10 μM PA452もHX531同様の結果を示したが、アンタゴニスト単独でTnfα mRNA発現を上昇させてしまった。また、10 μM UVI3003は細胞毒性を示したことから濃度の検討を行った結果、5 μMの濃度でTnfα mRNAの抑制が認められ、単独群では対象群と変化は認められなかった。また、RXRαのKD細胞樹立の為５種類のshRNAを購入し導入方法の条件検討を行った。shRNA導入後、細胞を回収しmRNA発現をRT-qPCR法を用いて調べた結果、50%程度のKD効率をもつ細胞を得ることができた。しかし、KD細胞として用いるにはKD効率がまだ低いと言える。今後RXRαのKD細胞樹立の為に更に条件の検討を行うと共に、RXRαのアンタゴニストやKD細胞を用い、RXRを介したミクログリアの活性化抑制の機序を調べていく予定である。

Lipid dyslipidemia ア ア ア ハ ハ ハ ハ ハ 険 である である pathogenesis of ア (AD) 険 risk factors である. "Lipid metabolism の -" に よ る "ミ ク ロ グ リ ア の activeness" が AD 発 disease に 駆 first す る の で は な い か と exam え た. ミ ク ロ グ リ ア cell lines と し て BV2 cells を い, "lipid metabolism の -" と し て パ ル ミ チ ン acid (PA) 200 mu M を い た と こ ろ inflammatory サ イ ト カ イ ン の mRNA 発 now rising の が み と め ら れ た. RXR ア ゴ ニ ス ト で あ る Bexarotene (BEX) を PA と に at the same time adding し た と こ ろ, PA に よ る Tnf alpha mRNA 発 now の raised が inhibit さ れ た. こ の unseen fruit を 検 card す る for に RXR ア ン タ ゴ ニ ス ト HX531 を with い た と こ ろ, BEX に よ る Tnf alpha mRNA 発 inhibit sharper now disappear fruit が し た こ と か ら, PA induced に よ る anti inflammation 応 や small cell body ス ト レ ス は, RXR を dielectric し て inhibit さ れ る と exam え ら れ た. This year は そ の RXR を interface し た anti-inflammatory unseen fruit を に more detailed し く 検 card す る に, ア ン タ ゴ ニ ス ト と し て PA452 と UVI3003 を with い る だ け で な く, RXR alpha KD cell の set も try み た. With others in 10 microns PA452 も HX531 を の results shown し た が, ア ン タ ゴ ニ ス ト 単 alone で Tnf alpha mRNA 発 now rising を さ せ て し ま っ た. ま た, 10 microns UVI3003 は cytotoxicity を shown し た こ と か ら concentration の 検 line for を っ た result, 5 microns の concentration で Tnf alpha mRNA の inhibit が recognize め ら れ, 単 alone group で は elephants seaborne と variations change は recognize め ら れ な か っ た. Youdaoplaceholder0, RXRα <s:1> KD cells are used to establish <s:1> as five types of <s:1> shRNAを. Purchase of <s:1> introduction methods <e:1> and conditions 検 discuss を line った. ShRNA after import, cell を back 収 し mRNA 発 now を RT を qPCR method using い て adjustable べ た results, degree of 50% の KD sharper rate を も を つ cells have る こ と が で き た. The efficacy of KD cells is がまだ low, と と, and える. Future RXR alpha の KD cells establish の conditions for に more に の 検 line for を う と に, RXR alpha の ア ン タ ゴ ニ ス ト や を い, KD cells RXR を interface し た ミ ク ロ グ リ ア の activeness inhibit の machine sequence を adjusting べ て い く designated で あ る.