Activation of microglia by lipid metabolites and inhibitory effect by natural nuclear receptor agonists

脂质代谢物对小胶质细胞的激活和天然核受体激动剂的抑制作用

• 批准号: 20K22728
• 负责人: 篠田 知恵
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22728/
• 关键词: 脂質代謝の変調; アルツハイマー病; ミクログリア; 核内受容体; 炎症; 脂肪酸; プレクリニカル; 脂質代謝

脂質異常症はアルツハイマー症（AD）発症の危険因子である。「脂質代謝の変調」による「ミクログリアの活性化」がAD発症に先駆するのではないかと考えた。ミクログリア細胞株としてBV2細胞を用い、「脂質代謝の変調」としてパルミチン酸（PA）200 μMを用いたところ炎症性サイトカインのmRNA発現の上昇がみとめられた。RXRアゴニストであるBexarotene（BEX）をPA と同時に添加したところ、PA によるTnfα mRNA 発現の増加が抑制された。この効果を検証する為にRXRアンタゴニストHX531を用いたところ、BEX によるTnfα mRNA 発現抑制効果が消失したことから、PA 誘導による炎症反応や小胞体ストレスは、RXRを介して抑制されると考えられた。本年はそのRXRを介した抗炎症効果を更に詳しく検証する為に、アンタゴニストとしてPA452とUVI3003を用いるだけでなく、RXRα KD細胞の樹立も試みた。10 μM PA452もHX531同様の結果を示したが、アンタゴニスト単独でTnfα mRNA発現を上昇させてしまった。また、10 μM UVI3003は細胞毒性を示したことから濃度の検討を行った結果、5 μMの濃度でTnfα mRNAの抑制が認められ、単独群では対象群と変化は認められなかった。また、RXRαのKD細胞樹立の為５種類のshRNAを購入し導入方法の条件検討を行った。shRNA導入後、細胞を回収しmRNA発現をRT-qPCR法を用いて調べた結果、50%程度のKD効率をもつ細胞を得ることができた。しかし、KD細胞として用いるにはKD効率がまだ低いと言える。今後RXRαのKD細胞樹立の為に更に条件の検討を行うと共に、RXRαのアンタゴニストやKD細胞を用い、RXRを介したミクログリアの活性化抑制の機序を調べていく予定である。

Lipid dyslipidemia (AD) is a risk factor for dyslipidemia. "Lipid metabolism adjustment" and "activation of lipid metabolism" are the first steps for AD syndrome. Mikan BV2 cell strain, "lipid metabolism adjustment", としてパルミチン acid (PA) 200 μMをいたところinflammatory サイトカインのmRNA発appearsのriseがみとめられた. RXR アゴニストであるBexarotene (BEX) をPA とsimultaneously にadd したところ, PA によるTnfα mRNA 発appear のincrease plus がinhibition された.このeffectを検证する is RXRアンタゴニストHX531をいたところ、BEX によるTnfα mRNA The inhibitory effect of the disease disappears, the PA induces inflammation and the reaction is suppressed, and the RXR inhibitor suppresses the inflammation and suppresses the reaction. This year, the anti-inflammatory effect of RXR has been introduced and the details of its anti-inflammatory effect have been updated. Used for PA452 and UVI3003, RXRα KD cells are established and tested. The results of 10 μM PA452 and HX531 are the same as those of Tnfα mRNA. 10 μM UVI3003 cytotoxicity test results, 5 μM concentration test results for Tnfα The suppression of mRNA is not recognized, and the single group is the same as the elephant group and the change is changed.また, RXRα KD cell establishment and conditions for the purchase and introduction of 5 types of shRNA were discussed. After the introduction of shRNA, the cells were recovered and the mRNA was expressed using the RT-qPCR method. As a result, the KD efficiency of 50% was obtained and the cells were obtained.しかし、KD cells are used いるにはKD efficiency is low いと说える. In the future, the conditions for the establishment of RXRα KD cells will be changed, and the conditions for RXRα KD cells will be changed. KD cells are used, RXR is introduced and the mechanism of activation inhibition is determined.