Activation of microglia by lipid metabolites and inhibitory effect by natural nuclear receptor agonists

脂质代谢物对小胶质细胞的激活和天然核受体激动剂的抑制作用

• 批准号: 20K22728
• 负责人: 篠田 知恵
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22728/
• 关键词: 脂質代謝の変調; アルツハイマー病; ミクログリア; 核内受容体; 炎症; 脂肪酸; プレクリニカル; 脂質代謝

脂質異常症はアルツハイマー症（AD）発症の危険因子である。「脂質代謝の変調」による「ミクログリアの活性化」がAD発症に先駆するのではないかと考えた。ミクログリア細胞株としてBV2細胞を用い、「脂質代謝の変調」としてパルミチン酸（PA）200 μMを用いたところ炎症性サイトカインのmRNA発現の上昇がみとめられた。RXRアゴニストであるBexarotene（BEX）をPA と同時に添加したところ、PA によるTnfα mRNA 発現の増加が抑制された。この効果を検証する為にRXRアンタゴニストHX531を用いたところ、BEX によるTnfα mRNA 発現抑制効果が消失したことから、PA 誘導による炎症反応や小胞体ストレスは、RXRを介して抑制されると考えられた。本年はそのRXRを介した抗炎症効果を更に詳しく検証する為に、アンタゴニストとしてPA452とUVI3003を用いるだけでなく、RXRα KD細胞の樹立も試みた。10 μM PA452もHX531同様の結果を示したが、アンタゴニスト単独でTnfα mRNA発現を上昇させてしまった。また、10 μM UVI3003は細胞毒性を示したことから濃度の検討を行った結果、5 μMの濃度でTnfα mRNAの抑制が認められ、単独群では対象群と変化は認められなかった。また、RXRαのKD細胞樹立の為５種類のshRNAを購入し導入方法の条件検討を行った。shRNA導入後、細胞を回収しmRNA発現をRT-qPCR法を用いて調べた結果、50%程度のKD効率をもつ細胞を得ることができた。しかし、KD細胞として用いるにはKD効率がまだ低いと言える。今後RXRαのKD細胞樹立の為に更に条件の検討を行うと共に、RXRαのアンタゴニストやKD細胞を用い、RXRを介したミクログリアの活性化抑制の機序を調べていく予定である。

血脂血症是阿尔茨海默氏病（AD）发展的危险因素。我们认为，“小胶质细胞的激活”通过“脂质代谢的调节”可以在AD发作之前。使用BV2细胞作为小胶质细胞系，使用200μm棕榈酸酯（PA）调节脂质代谢，并观察到炎性细胞因子的mRNA表达增加。当Bexarotene（Bex）与PA同时添加RXR激动剂时，抑制了PA的TNFαmRNA表达的增加。为了验证这种效果，使用了RXR拮抗剂HX531，并且通过BEX抑制TNFαmRNA表达的作用消失了，人们认为PA诱导的炎症反应和内质网应激通过RXR抑制。今年，为了进一步检查其通过RXR的抗炎作用，我们不仅使用PA452和UVI3003作为拮抗剂，而且还试图建立RXRαKD细胞。 10μMPA452也显示出与HX531相似的结果，但单独拮抗剂增加了TNFαmRNA的表达。此外，由于10μMUVI3003表现出细胞毒性，因此我们研究了浓度，发现在5μM的浓度下观察到TNFαmRNA抑制，并且在单个组中没有观察到目标组中的单个组中的变化。此外，购买了五种类型的shRNA来建立RXRα的KD细胞，并检查了引入方法的条件。引入shRNA后，收集细胞并使用RT-QPCR检查mRNA表达，并获得了KD效率约为50％的细胞。但是，可以说KD效率仍然很低，可用作KD细胞。将来，我们将进一步研究建立RXRα的KD细胞的条件，并研究RXR介导的使用RXRα拮抗剂和KD细胞对小胶质细胞激活的抑制机制。