ANGPTL5と脂質代謝・動脈硬化との関係をウサギモデルで解明する

使用兔模型阐明 ANGPTL5 与脂质代谢/动脉硬化之间的关系

• 批准号: 20K22761
• 负责人: 小池 智也
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22761/
• 关键词: ANGPTL5; 脂質異常症; 動脈硬化; KOウサギ; 血中脂質

近年、脂質異常症ならびに動脈硬化の新たな治療標的として、アンジオポエチン様タンパク質 (ANGPTLs, Angiopoietin-like proteins)ファミリー分子のうち、ANGPTL3,4,5が注目されているが、ANGPTL5は、主要な実験動物であるげっ歯類において、相当する遺伝子が存在しないため、遺伝子を欠損(ノックアウト,KO)した動物が作成できず、ANGPTL5分子の機能解析が十分に進んでいなかった。その問題解決のため、ANGPTL5遺伝子を持つウサギに着目し、ゲノム編集技術(Crispr/Cas9) によりANGPTL5を欠損するKOウサギを開発し、機能解析を行うことを計画した。当該年度は、ANGPTL5 KOウサギの作成を計画し、ウサギのANGPTL5配列を標的としたSingle guide RNA (sgRNA)のデザイン、候補sgRNAの選抜、受精卵へのCas9蛋白/sgRNA複合体のマイクロインジェクションによる導入と受精卵培養による胚盤胞までの発生を確認した。さらに、遺伝子操作した受精卵の仮親への胚移植も一部実施したが、産仔は得られていない。これにより、ANGPTL5のKOウサギの作製に向けた最初のステップはクリアできた。今後、新たなプロジェクトで、受精卵の胚移植が引き継がれ、生体を得ることができれば、世界初のANGPTL5 KOウサギの誕生となり、ANGPTL5の機能解析を実現できる強力なツールとなりうる。ANGPTL5の機能を明らかにできれば、これまでにない新たな脂質異常症・動脈硬化の治療法の開発に繋がることが期待され、社会的意義は大きい。

近年来，ANGPTL3，4和5一直在引起血管生成素样蛋白（ANGPTLS）家族分子的关注，作为血脂异常和动脉粥样硬化的新治疗靶标。但是，ANGPTL5无法产生缺少的动物（基因敲除，KO）基因，因为啮齿动物，主要的实验动物不存在相应的基因，并且对Angptl5分子的功能分析尚未得到充分进展。为了解决这个问题，我们专注于携带Angptl5基因的兔子，并计划开发使用基因组编辑技术（CRISPR/CAS9）并进行功能分析的KO兔子。在今年，我们计划创建一个Angptl5 KO兔子，并确认针对兔Angptl5序列的单个指南RNA（SGRNA）的设计，选择候选SGRNA，将Cas9蛋白/SGRNA复合物引入受精卵中，并通过微分调查和通过受肥蛋培养的囊性蛋白质的发展。此外，还进行了一些基因工程施肥的卵向临时父母的胚胎转移，但未获得任何出生。这使我们能够完成创建Angptl5 KO兔子的第一步。如果在一个新项目中携带受精卵的胚胎转移并可以获得生物体，它将是世界上第一个Angptl5 KO Rabbit的诞生，它将成为可以实现Angptl5功能分析的强大工具。如果可以澄清ANGPTL5的功能，则有望导致血脂异常和动脉硬化的新疗法的发展，并且具有很大的社会意义。

项目成果

Hyperlipidemic Rabbit Models for Anti-Atherosclerotic Drug Development

• DOI: 10.3390/app10238681
• 发表时间: 2020-12
• 期刊: Applied Sciences
• 作者: M. Niimi;Yajie Chen;Haizhao Yan;Yao Wang;T. Koike;Jianglin Fan