Unraveling roles of maternal bile acid in fetal development and stem cell regulation

揭示母体胆汁酸在胎儿发育和干细胞调节中的作用

基本信息

批准号：
20K23380
负责人：
三原田賢一
金额：
$ 35.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Fund for the Promotion of Joint International Research (Home-Returning Researcher Development Research)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-03-12 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、Cyp27a1酵素を欠損した母体から出生したマウスでは肺胞形成が不全であるために全個体が呼吸窮迫症候群ですぐに死亡すること、その原因が7α-hydroxycholesterol（7α-HC）の蓄積によるものであることを明らかにしていた。リガンド結合による熱安定性変化を利用した標的タンパク質の同定方法（Proteome Integral Solubility Alterations: PISA）を実施したところ、7α-HCは肺や胎盤上皮で発現しているFauタンパク質に結合し、その安定性を低下させる事がわかった。Fauはリボソームタンパク質の一種で、Small subunitとLarge subunitの間に挟まってアセンブリを制御することが知られている。マウス肺がん細胞であるLLCの培養に7α-HCを添加したところ、タンパク質の合成が低下し、リボソームアセンブリが低下することが観察された。さらにshRNAを用いてFauをノックダウンしたところ、同様にリボソームアセンブリの低下が観察された。Cyp27a1欠損母体内で発生中の胎児の肺を取り出して解析したところ、リボソームアセンブリが低下していた。上記の発見から、妊娠中にCyp27a1酵素が機能しないことで7α-HCのようなオキシステロールが蓄積し、それがFauの機能を低下させてリボソームアセンブリを抑制することで細胞の分化に影響が出ていると結論づけた。本内容は現在論文投稿準備中である。上記に加えて、Cyp7b1欠損マウスの解析を開始している。Cyp7b1を欠損した母体から出生したマウスは死産ではないが、1週間を経過する頃から死亡する個体が生じることがわかった。現在その死因の特定中である。

到目前为止，已经揭示了在缺乏CYP27A1酶的母亲出生的小鼠中，肺泡发生不足，并且所有个体立即死于呼吸遇险综合征，原因是原因是由于7α-羟基胆固醇（7α-HC）的积累。当执行使用配体与热稳定性变化（PISA）结合鉴定靶蛋白的方法时，发现7α-HC与在肺和胎盘上皮中表达的FAU蛋白结合，从而降低了其稳定性。 FAU是一种核糖体蛋白，已知粘在一个小亚基和调节组装之间。据观察，将7α-HC添加到LLC的培养物，小鼠肺癌细胞，并降低了蛋白质合成并减少核糖体组装。此外，当使用shRNA击倒FAU时，观察到核糖体组装的类似降低。当去除CYP27A1缺陷孕妇体内胎儿的肺并分析时，发现核糖体组装减少。从上面的发现中，我们得出结论，妊娠期间CYP27A1酶的无能会导致诸如7α-HC之类的氧甲醇积累，从而降低了FAU的功能并抑制核糖体组装，从而影响细胞分化。本文目前正在准备提交论文。除上述外，对CYP7B1缺陷型小鼠的分析已经开始。尽管从母体不足的CYP7B1出生的小鼠并没有死产，但发现个人死于大约一周后。目前正在确定死亡原因。