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翻訳停滞解消因子YaeJの生理的役割と反応機構の解明

阐明翻译失速解决因子YaeJ的生理作用和反应机制

基本信息

批准号：
21H02113
负责人：
栗田大輔
金额：
$ 11.32万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02113/
关键词：
リボソーム YaeJ 翻訳タンパク合成

项目摘要

本研究は、YaeJによるリボソームレスキュー機構の分子メカニズムを明らかにするために、YaeJ/リボソーム複合体に対して、機能解析および構造解析を行うものである。令和4年度は部位特異的ラジカルプロービングを中心に進めた。システインを導入したYaeJ変異体を多数作製し、in vitroでペプチジルtRNA加水分解の活性を確認した。多くの変異体について野生型YaeJと同等の活性を有していることを確認した。次にin vitroで翻訳停滞リボソームに対するプロービングを行った。その結果YaeJのリボソーム上での結合位置を特定することに成功した。また、ペプチジルtRNAの活性が低下した変異体について、バイオレイヤー干渉法によってリボソームへの結合活性を評価した。その結果、YaeJのC末端の塩基性アミノ酸に変異を導入すると、野生型YaeJと比べて解離定数Kdが30倍以上上昇しており、リボソームへの結合活性の低下が見られた。前年度にリボソーム関連遺伝子の欠損株に由来するリボソームについて、YaeJのリボソームへの結合には影響しないがペプチジルtRNA加水分解活性を低下させることを発見した。このリボソームに対してYaeJのラジカルプロービングを行ったところ、ラジカルプロービングのパターンに変化が見られた。

This study focuses on the molecular structure analysis of YaeJ and YaeJ/YaeJ complex, functional analysis and structural analysis. Order and 4 years of site-specific requests for information In vitro, the activity of tRNA hydrolysis was confirmed. The wild type YaeJ has the same activity as the wild type YaeJ and has the same activity as the wild type YaeJ. The next step in the vitro is to open the door to the next step. The result is that YaeJ's combination position is specified successfully. The activity of tRNA was decreased and the binding activity of tRNA was evaluated. As a result, the binding activity of the C-terminal amino acid variant of YaeJ was significantly lower than that of wild-type YaeJ, and the dissociation constant Kd was 30-fold higher than that of wild type YaeJ. In the past year, the causes of the deficiency in the expression of the related tRNA and the effect of the combination of the expression of the related tRNA on the hydrolysis activity of the tRNA were found This is the first time I've ever seen a girl who's been in a relationship with someone else.