Construction of a new Vero cell system to be the basis for coronavirus research and vaccine development

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本課題では（１）Vero細胞のゲノム編集等を通じて、コロナウイルス（CoV）を効率よく増殖させ、CoVワクチン細胞基材ともなりえる新規細胞株を作出する、（２）Vero細胞ゲノムに存在する完全長で変異のない内在性レトロウイルス（SERV）の感染リスクを評価し、Vero細胞で作られるワクチンの安全性の確保に資する、（３）CoV感染に特徴的な細胞内構造の変化を無染色・非侵襲条件下にリアルタイムで解析してウイルス生活環の基本情報を提供する、という3つの目標を掲げている。以下に本年度の実績を述べる。１）昨年度に樹立したⅡ型膜貫通型セリンプロテアーゼTMPRSS2 (isoform 1あるいはisoform 2)を安定的に産生させたポリオウイルス受容体（PVR）欠損Vero細胞について、その有用性を検討した。複数のSARS-CoV-2(CoV2)株（従来株、デルタ株、オミクロン株）における感染効率を比較したところ、TMPRSS2産生PVR欠損Vero細胞では、PVR欠損Vero細胞あるいはVero細胞に比し感染効率の上昇が認められた。一方、その亢進の程度は株間で異なっており、感染経路におけるTMPRSS2の関与に差があることを示唆していると考えられた。２）SERV遺伝子を導入したHEK293FT細胞をドナー細胞とした共培養系を構築し、SERVの感染能の評価を試みた。予備的な結果から、レシピエントの細胞種等の条件検討が必要と考えられた。３）固定した黄熱ウイルスレプリコン細胞のアポダイズド位相差・蛍光顕微鏡観察から、ウイルスタンパク質等が核に近接する細胞内構造に分布することが示された。また、CoV2感染においては、株により細胞変性の程度に顕著な差異があることが示された。