Construction of a new Vero cell system to be the basis for coronavirus research and vaccine development

构建新的 Vero 细胞系统作为冠状病毒研究和疫苗开发的基础

• 批准号: 21H02630
• 负责人: 花田 賢太郎
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02630/
• 关键词: 宿主細胞; ウイルス; Vero細胞; コロナウイルス; 内在性レトロウイルス; アポダイズド位相差; レギュラトリーサイエンス; ベロ細胞; ワクチン; ウイルス安全性評価

本課題では（１）Vero細胞のゲノム編集等を通じて、コロナウイルス（CoV）を効率よく増殖させ、CoVワクチン細胞基材ともなりえる新規細胞株を作出する、（２）Vero細胞ゲノムに存在する完全長で変異のない内在性レトロウイルス（SERV）の感染リスクを評価し、Vero細胞で作られるワクチンの安全性の確保に資する、（３）CoV感染に特徴的な細胞内構造の変化を無染色・非侵襲条件下にリアルタイムで解析してウイルス生活環の基本情報を提供する、という3つの目標を掲げている。以下に本年度の実績を述べる。１）昨年度に樹立したⅡ型膜貫通型セリンプロテアーゼTMPRSS2 (isoform 1あるいはisoform 2)を安定的に産生させたポリオウイルス受容体（PVR）欠損Vero細胞について、その有用性を検討した。複数のSARS-CoV-2(CoV2)株（従来株、デルタ株、オミクロン株）における感染効率を比較したところ、TMPRSS2産生PVR欠損Vero細胞では、PVR欠損Vero細胞あるいはVero細胞に比し感染効率の上昇が認められた。一方、その亢進の程度は株間で異なっており、感染経路におけるTMPRSS2の関与に差があることを示唆していると考えられた。２）SERV遺伝子を導入したHEK293FT細胞をドナー細胞とした共培養系を構築し、SERVの感染能の評価を試みた。予備的な結果から、レシピエントの細胞種等の条件検討が必要と考えられた。３）固定した黄熱ウイルスレプリコン細胞のアポダイズド位相差・蛍光顕微鏡観察から、ウイルスタンパク質等が核に近接する細胞内構造に分布することが示された。また、CoV2感染においては、株により細胞変性の程度に顕著な差異があることが示された。

In this project, (1) Vero cell cycle editing set and so on, the rate of colony formation (CoV), the cell base material (CoV), the cell strain (s), (2) the presence of Vero cell cycle (Vero), the presence of complete long-term infection (SERV), and so on. Vero cells make sure that they are safe, (3) they are infected with CoV, and they are not stained ininvasively. Under the condition of non-invasive staining, they analyze the information of their daily life and provide information about their basic information. The following "this year" will describe the situation. 1) Last year, TMPRSS2 (isoform 1 and isoform 2) was found to be stable in terms of Vero tolerance and usefulness. the main results were as follows: 1) Last year, the type II membrane was not stable. The infection rate of multiplicative SARS-CoV-2 (CoV2) was higher than that of PVR, PVR was higher than that of Vero, and that of PVR was higher than that of infection. On the one hand, the degree of hyperactivity, the degree of infection, the route of infection, the degree of hyperactivity, the route of infection, the level of infection, the degree of hyperactivity, the route of infection, the level of infection, and the level of infection. 2) the SERV gene was transferred into the HEK293FT cell line, and the co-culture system was isolated. The SERV infection could be tested. It is necessary to test the results of the equipment, the number of cells, and other conditions. 3) fixing the location of the cell, the phase difference of the cell, the position of the cell. The infection rate of CoV2 and the degree of cellular sex of the strains were different.

项目成果

SARS CoV-2 mRNA/LNPワクチンの製造と品質情報について

关于 SARS CoV-2 mRNA/LNP 疫苗的生产和质量信息

• 发表时间: 2022
• 作者: You-Ran Luo;Tada-aki Kudo;Kanako Tominami;Satoshi Izumi;Yohei Hayashi;Takakuni Tanaka;Takuya Noguchi;Atsushi Matsuzawa;Hang Wang;Junichi Nakai;Guang Hong;花田賢太郎
• 通讯作者: 花田賢太郎

Characteristics of SARS-CoV-2 mRNA/LNP vaccines and their official verification

SARS-CoV-2 mRNA/LNP疫苗的特点及其官方验证

• 发表时间: 2021
• 作者: 石川貴大;原田彩佳;横川真梨子;前田知輝;日向寺孝禎;藤田浩平;野崎智裕;嶋田一夫;大澤匡範;花田賢太郎
• 通讯作者: 花田賢太郎

黄熱ウイルスサブゲノミックレプリコンを持続的に保持するVero細胞の樹立

建立持久保留黄热病病毒亚基因组复制子的 Vero 细胞

Vero細胞ゲノムにコードされるサル内在性レトロウイルスの特性解析

Vero 细胞基因组中编码的猿猴内源逆转录病毒的表征

• 发表时间: 2022
• 作者: 齊藤恭子;佐久間智理;山地俊之;花田賢太郎
• 通讯作者: 花田賢太郎

C10orf76-PI4KB軸によって遠位ゴルジ体へのCERT依存性セラミド輸送が組織化される

C10orf76-PI4KB 轴协调 CERT 依赖性神经酰胺转运至远端高尔基体

• 发表时间: 2022
• 作者: 水池 彩;酒井 祥太;加藤 薫;山地 俊之;花田 賢太郎
• 通讯作者: 花田 賢太郎