正中縫線核セロトニン合成能低下による海馬機能低下とうつ様行動増加仮説の検証

验证了由于中缝核血清素合成能力下降导致海马功能下降和抑郁样行为增加的假设

基本信息

批准号：
21H02668
负责人：
吉岡充弘
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02668/
关键词：
セロトニン

项目摘要

令和3年度の研究計画は、目的1「1. 正中縫線核のセロトニン合成能のみを時空間特異的に低下させる方法を確立」を行うことであった。ゲノム編集を引き起こすためのアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの脳内投与では、正中縫線核の大部分でTPH2ノックアウトを引き起こし、かつ他のセロトニン神経起始核にまで漏れない投与量・方法を決定する必要がある。いくつかの投与座標、投与量を検討した結果、正中縫線核の吻側側と尾側側にそれぞれ800nL注入することで最適な結果を得ることが出来た。さらに、TPH2遺伝子のノックアウトの確認として、シークエンスによるDNA配列変化の確認、免疫染色によるTPH2タンパク発現消失の確認、HPLC-ECD(電気化学検出高速液体クロマトグラフィー)によるセロトニン量減少の確認、の3つを実施することが計画されていた。前者二つは完了し、DNA配列が目的遺伝子だけで変化していること、TPH2タンパク発現が消失していることを確認できた。最後のHPLCについては実施方法を検討中に研究代表者が死去したため、課題が打ち切られ、完了することが出来なかった。また、正中縫線核-海馬経路特異的な操作のために、Cre依存性にCas9を発現する改変AAVベクターは研究分担者の西谷直也(金沢大学)に作製を依頼し、準備を進めていたが、これも途中で中止となった。

2021年的研究计划是目标1：建立一种方法，以特异性降低中位核核时空时空的羟色胺合成能力。脑内给药腺相关病毒（AAV）载体引起基因组编辑需要确定在大多数中位raphe核中引起TPH2敲除的剂量和方法，并且不会泄漏到其他5-羟色胺神经起源。在检查了几个剂量坐标和剂量后，通过分别在中位raphe核的尾部和尾部注射800 nl获得了最佳结果。此外，计划确认TPH2基因的敲除：通过测序确认DNA序列的变化，通过免疫染色来证实TPH2蛋白表达的消失，并证实了通过HPLC-ECD（电化学检测高表象液体液态学的HPLC-ECD）的降低。前两个完成，并证实DNA序列仅通过靶基因改变，并且TPH2蛋白的表达丢失了。最终的HPLC未完成，因为主要研究人员在考虑实施方法时就去世了。此外，由于对中间raphe核 - 海马途径的特异性操纵，我们要求研究人员Nishitani Naoya（Kanazawa University）准备以CRE依赖性方式表达Cas9的修饰的AAV矢量，尽管这也暂时暂停了。