正中縫線核セロトニン合成能低下による海馬機能低下とうつ様行動増加仮説の検証

验证了由于中缝核血清素合成能力下降导致海马功能下降和抑郁样行为增加的假设

• 批准号: 21H02668
• 负责人: 吉岡 充弘
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02668/
• 关键词: セロトニン

令和3年度の研究計画は、目的1「1. 正中縫線核のセロトニン合成能のみを時空間特異的に低下させる方法を確立」を行うことであった。ゲノム編集を引き起こすためのアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの脳内投与では、正中縫線核の大部分でTPH2ノックアウトを引き起こし、かつ他のセロトニン神経起始核にまで漏れない投与量・方法を決定する必要がある。いくつかの投与座標、投与量を検討した結果、正中縫線核の吻側側と尾側側にそれぞれ800nL注入することで最適な結果を得ることが出来た。さらに、TPH2遺伝子のノックアウトの確認として、シークエンスによるDNA配列変化の確認、免疫染色によるTPH2タンパク発現消失の確認、HPLC-ECD(電気化学検出高速液体クロマトグラフィー)によるセロトニン量減少の確認、の3つを実施することが計画されていた。前者二つは完了し、DNA配列が目的遺伝子だけで変化していること、TPH2タンパク発現が消失していることを確認できた。最後のHPLCについては実施方法を検討中に研究代表者が死去したため、課題が打ち切られ、完了することが出来なかった。また、正中縫線核-海馬経路特異的な操作のために、Cre依存性にCas9を発現する改変AAVベクターは研究分担者の西谷直也(金沢大学)に作製を依頼し、準備を進めていたが、これも途中で中止となった。

The research plan for Ling and 3 years is opposite, objective 1 "1. The center line core can be synthesized by time-space-specific methods. For the compilation of the list, it is necessary to determine whether the initial core of the TPH and the initial core of the other TPH and the amount of input and method are necessary. The results of the calculation of the projection and the coordinates, the projection and the amount, the rostral and caudal sides of the median slit nucleus, and the optimal results of the 800nL injection are obtained. In addition, confirmation of TPH2 gene expression, confirmation of DNA alignment, confirmation of TPH2 gene disappearance by immunostaining, confirmation of HPLC-ECD(Electrochemical Detection of High Speed Liquid), confirmation of HPLC-ECD content reduction, and implementation of HPLC-ECD were carried out. The former is complete, the DNA sequence is changed, and the TPH2 is disappeared. Finally, the HPLC method was applied to the study. The representative died, the subject was cut off, and the study was completed. Naoya Nishiya (Kanazawa University), a research contributor to the study, is responsible for the development of Cre-dependent Cas9-specific operations in the hippocampus, and for the preparation and suspension of activities in the hippocampus.