正中縫線核セロトニン合成能低下による海馬機能低下とうつ様行動増加仮説の検証

验证了由于中缝核血清素合成能力下降导致海马功能下降和抑郁样行为增加的假设

• 批准号: 21H02668
• 负责人: 吉岡 充弘
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02668/
• 关键词: セロトニン

令和3年度の研究計画は、目的1「1. 正中縫線核のセロトニン合成能のみを時空間特異的に低下させる方法を確立」を行うことであった。ゲノム編集を引き起こすためのアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの脳内投与では、正中縫線核の大部分でTPH2ノックアウトを引き起こし、かつ他のセロトニン神経起始核にまで漏れない投与量・方法を決定する必要がある。いくつかの投与座標、投与量を検討した結果、正中縫線核の吻側側と尾側側にそれぞれ800nL注入することで最適な結果を得ることが出来た。さらに、TPH2遺伝子のノックアウトの確認として、シークエンスによるDNA配列変化の確認、免疫染色によるTPH2タンパク発現消失の確認、HPLC-ECD(電気化学検出高速液体クロマトグラフィー)によるセロトニン量減少の確認、の3つを実施することが計画されていた。前者二つは完了し、DNA配列が目的遺伝子だけで変化していること、TPH2タンパク発現が消失していることを確認できた。最後のHPLCについては実施方法を検討中に研究代表者が死去したため、課題が打ち切られ、完了することが出来なかった。また、正中縫線核-海馬経路特異的な操作のために、Cre依存性にCas9を発現する改変AAVベクターは研究分担者の西谷直也(金沢大学)に作製を依頼し、準備を進めていたが、これも途中で中止となった。

Reiwa 3rd year's research plan, purpose 1 "1. Establish a time-space-specific low-reduction method for synthesizing the median suture core".ゲノムCompiled by こすためのアデノ companion ウイルス (AAV) ベクターの脳内investigation and では, midline suture core のmost part TP H2 ノックアウトをinduced きこし, かつ他のセロトニン神経 Starting Core にまで leak れないInjection amount and method をDetermine するnecessary がある.いくつかのInjection and coordinates, investment amount を検検したresult, median suture core rostral side and caudal side Side injection of 800nL into the optimal solution will result in the best result.さらに、TPH2缝子のノックアウトのconfirmとして、シークエンスにConfirmation of changes in DNA alignment and immunostaining of TPH2 DNA has disappeared Confirmation, HPLC-ECD (electrochemical high-speed liquid chromatography) Confirmation of the decrease in the amount of よるセロトニン, の3つを実事することが Plan されていた. The former two are completed, the DNA alignment is completed, the remaining DNA sequence is changed, and the TPH2 is now confirmed and disappeared. In the end, the HPLC method was implemented and the research representative was dead, the project was cut, and the project was completed.また, median suture core-hippocampus tract-specific な operation のために, Cre-dependent にCas9 を発appear するchange変AAV ベクタThe research co-ordinator is Nishitani Naoya (Kanazawa University), who made the project, prepared it and stopped it on the way.