Investigation of molecular mechanisms for constitutive IRF4 expression in T-cell malignancies

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目的１）成人T細胞性白血病リンパ腫におけるIRF4の恒常的高発現が維持される分子メカニズムの解明とその制御方法の開発化合物ライブラリーによるIRF4蛋白発現スクリーニング: IRF4発現変化の検出系として、フローサイトメーターを用いたHigh throughput screening (HTS)の系を確立、北大化合物ライブラリー（約3000個の既存薬を搭載）の中から、成人T細胞性白血病リンパ腫患者由来細胞株のIRF4発現低下をもたらす候補化合物を同定した。検証実験を行い、いくつかの化合物ににおいて確認が得られた。機能的エンハンサー解析:成人T細胞性白血病リンパ腫細胞株と臨床検体のATACseqデータを解析した。IRF4遺伝子座周辺のopen chromatin領域を解析したところ症例間に共通する領域は見出されなかった。このことは、特定の機能的エンハンサー領域は存在せず、IRF4発現のメカニズムは症例間でheterogeneityが存在することを明らかにした。目的２）T細胞性腫瘍全体におけるIRF4恒常的発現異常の分布と頻度組織マイクロアレイ作成：北日本血液研究会(http://www.njhsg.com)と連携し、T細胞性腫瘍の組織マイクロアレイを作成した。IRF4および、その関連遺伝子であるBATF3の免疫組織染色を行ったところ、成人T細胞性白血病リンパ腫に置いては他のT細胞性腫瘍病型と比較して陽性頻度が高いことを見出した。目的３）IRF4発現制御の疲弊CAR-T細胞への応用IRF4発現を低下させる化合物は細胞障害性が強く、CCR4-CAR-T細胞の細胞疲弊を抑制するには不向きと考えられた。この対応として、IRF4の機能を抑制する分子をCARと同時にT細胞に導入する方針とし、実験を進めた。