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神経血管ネットワークを有するヒトiPS細胞由来高次肝組織の生体内での再構築

利用神经血管网络体内重建人 iPS 细胞来源的高级肝组织

基本信息

批准号：
21H02991
负责人：
小池直人
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02991/
关键词：
高次肝組織神経微小血管 iPS細胞血管門脈域

项目摘要

胆管、血管、神経が伴走して走行する門脈域を構築させるために、2021年度同様、ヒトiPS細胞由来の肝前駆細胞(hiPS-HE)、血管内皮細胞(hiPS-EC)、間葉系幹細胞(hiPS-STM)からなる多数の微小肝芽を神経幹細胞(hiPS-NCC)を3次元培養して得られた神経線維の上に添加し共培養した。2022年度はhiPS-NCCの誘導法を改良したことにより、より安定した実験結果を出すことに成功した。また、十分に神経線維を構築させるために、肝芽を追加するまでのhiPS-NCC単独の培養時間を10日から20日に延長した。hiPS-NCCにはGFPをhiPS-ECにはKO(Kusabira orange)を導入して可視化できるようにし、共培養した肝芽を蛍光顕微鏡でタイムラプス観察を行った。その結果、肝芽の共培養開始後、1から7日にかけて神経突起が肝芽に向かって伸びる様子が観察された。共培養7日目では、肝芽内で構築された血管の周りに神経線維が伴走している様子が観察された。また、CK19の免疫染色を行い肝芽における胆管の観察したところ、肝芽から胆管様に伸びた突起の周りに神経がまとわりついているように観察された。この形態は正常肝の門脈域の形態に近いものと考えられた。また、微小肝芽と肝芽の間に胆管構造の繋がりも観察された。神経を加えない群とで肝芽内の血管、胆管構造を、画像解析ソフトウエアを用いて定量解析し比較検討した。その結果、神経を加えない群では血管の総長、分岐数は有意に低下していた。胆管様の突起数も有意に短かった。また、培養上清中のアルブミン、フィブリノーゲン量をELISAにて測定すると神経の共培養を行なっていない群では有意に少なかった。また、アンモニアクリアランスも有意に低かった。

Bile ducts, blood vessels, nerves and portal veins are constructed in the portal vein area, 2021 same year, hiPS cells are derived from hepatic prehepatic cells (hiPS-HE), vascular endothelial cells (hiPS) -EC), mesenchymal stem cells (hiPS-STM) and a large number of tiny liver buds and stem cells (hiPS-NCC) are cultured in 3 dimensions and co-cultured with the addition of line dimensions. In 2022, the induction method of hiPS-NCC was improved and stabilized, and the result was successful.また, 10に神経线dimensional をconstruct させるために, liver bud をadd するまでのhiPS-NCC 単loneのcultivation time を10 days から20 days にextend した. hiPS-NCCにはGFPをhiPS-ECにはKO(Kusabira orange)をIntroduction and visualization of liver buds and co-culture of liver buds and microscopic examination of liver buds. As a result, after the co-culture of liver buds started, the liver buds were raised and the liver buds were stretched out on the 1st and 7th day. Co-cultivated for 7 days, the liver buds and the liver buds were incubated with the blood vessels that built the blood vessels around them.また, CK19 immunostaining, liver buds, bile ducts, liver budsら bile duct 様にびた protrusion のweek りに神経がまとわりついているように観看された. The shape of the normal liver is the portal domain of the liver.また, tiny liver buds, liver buds, bile duct structures, and bile duct structures. The structure of the blood vessels and bile ducts in the liver buds is analyzed by the analysis of the structure of the blood vessels and bile ducts in the liver buds, and the image analysis is performed using the quantitative analysis of the images. The results of その, the 神経を加えないgroup, the blood vessels, the length of the vasculature, the number of branches, the intentional にlower, していた. The number of protrusions in the bile duct is intentionally short.また, のアルブミン, フィブリノーゲンquantity ELISA in the culture supernatantてdeterminationすると神経のco-cultureを行なっていないgroupではmeaningに小なかった.また、アンモニアクリアランスも intentional にlow かった.