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革新的三次元培養法による肝幹細胞を起点とした肝臓組織の再構築

采用创新的三维培养方法，以肝干细胞为起点重建肝组织

基本信息

批准号：
21659308
负责人：
小池直人
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659308/
关键词：
幹細胞自己複製三次元培養組織構築血管化

项目摘要

本研究では、幹細胞を起点とした固形臓器の組織化過程を理解するため、申請者らが独自に確立した血管網の人為的再構成系を駆使して、肝幹細胞を起点とした肝臓組織の再構築法を開発している。平成22年度は、肝幹細胞を起点とした肝臓組織の構築過程における、血管系細胞の役割について検討した。はじめに、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)とヒト間葉系幹細胞(hMSC)を用いてヒト血管ネットワークを異所性に再構成させる技術の開発を試みた。マウス頭蓋に作製した透明な観察窓(クラニアルウインドウ)内にレトロウイルスベクターにより蛍光遺伝子を導入したEGFP-HUVECとKusabira Orange-hMSCを各々移植し、その後、顕微鏡下で観察した。その結果、移植後、1週間以内にHUVECからなるネットワーク構造が確認された。このとき、HUVECの周囲にはhMSCが多数存在していた。また、移植後3週目以降、HUVECから成る管腔構造がhMSCで覆われることを確認した。再構成されたヒト血管ネットワークは、少なくとも移植後8週目まで良好な形態を示した。次に、HUVEC-hMSCとともに未分化なヒト肝臓細胞を同時に移植し、組織構築過程を観察した。移植後4週目においてクラニアルウインドウ内の組織を観察したところ、移植細胞に由来する肝臓様組織が再構成されていることを見いだした。移植後8週目の組織についてヒト特異抗体を用いた免疫組織化学を実施したところ、多数のアルブミン陽性細胞が観察された。また、再構成されたヒト肝臓組織内において、壁細胞に裏打ちされたヒト血管内皮細胞の管腔構造が確認された。本研究において確立したヒト肝臓組織の再構成技術は、実質細胞と血管ネットワークの相互作用の解析系として有用と考えられる。

In this study, in the process of tissue engineering, we understand that patients and applicants are responsible for the establishment of artificial reconstitution of blood vessels, so that liver tissue reconstitution method is used. In the year of Pingcheng 22, the starting point of liver cancer and liver cancer, the liver tissue and the blood vessel system were divided into two groups. The vascular endothelial cell (HUVEC), the vascular endothelial cell (hMSC), the vascular endothelial cell, the vascular endothelial cell, the vascular endothelial cell Please make sure that you can see the transparency in the EGFP-HUVEC Kusabira Orange-hMSC. After that, you can look at it in the micro-meter. The result of the test, after transplantation, within 1 year after the transplantation, the HUVEC verification verification was completed and the confirmation was made. In most cases, there is a "hMSC" in both HUVEC and weekends. After transplantation, 3 weeks after transplantation, the HUVEC became lumen, and the hMSC was confirmed. The blood vessels were reorganized into small blood vessels and small blood vessels. After transplantation, 8 eyes were in good shape. At the same time, the undifferentiated liver cells were grafted in the same time, and the process of tissue transplantation was monitored in the second and HUVEC-hMSC cycles. Four months after transplantation, the internal tissue of the transplant was examined, and the origin of the transplant was determined. The liver tissue of the transplant was re-established. Eight months after transplantation, the specific antibodies were detected by immunohisto-chemical staining, and most of them were detected by immunocytochemistry. In the liver tissue, the vascular endothelial cells and the lumen of the vascular endothelial cells were detected and confirmed. The purpose of this study is to ensure that the liver tissue is reorganized into a technical and vascular interaction analysis system.