好中球と関連miRNA発現制御による創傷治癒遅延機構の解明と革新的治療法の開発

通过调节中性粒细胞和相关miRNA表达阐明伤口愈合延迟的机制并开发创新治疗方法

基本信息

批准号：
21H03100
负责人：
梅原敬弘
金额：
$ 11.07万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan (2022-2023)Nagasaki University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03100/
关键词：
創傷治癒 microRNA 炎症糖尿病好中球糖尿病性創傷

项目摘要

創傷治癒過程の異常を病態の一つに持つ疾患は複数存在し、その発症率は加齢に伴い増加する。しかし、未だそれらの疾患に対する有効な治療法は確立されておらず、新規治療法の開発が求められる。これまで、治癒遅延を惹起する糖尿病（DM）性創傷では炎症期で活性化する好中球が機能異常を起こしていることを明らかにし、その原因はmicroRNA-129-2-3p（miR-129）発現レベルの低下による生物学的プロセス障害の可能性を示した。また、miR-129発現レベルの回復が治癒遅延を改善する効果があることを明らかにした。先行研究により、microRNA（miRNA）発現はcircularRNA（circRNA）に制御されている可能性が示唆されている。そこで、本研究ではmiR-129発現制御のメカニズムを解明するべく、DM由来好中球特異的に発現するcircRNAの網羅的発現解析をマイクロアレイを用いて行った。その結果、miR-129の結合配列を２箇所持つcircRNA発現がDM由来好中球で有意に増加したことをqRT-PCRを用いて確認した。このcircRNAは、miR-129と逆の発現パターンを示しているため、DM由来好中球におけるmiR-129発現は、circRNAによって制御されている可能性が示唆された。従って、このcircRNA-miR-129発現制御による創傷治癒促進効果の検討が次なる課題である。並行して、創傷治癒過程の異常を病態の一つとするDM以外の疾患において、次世代シーケンス（NGS）を用いた疾患由来好中球特異的に発現するmiRNAの網羅的発現解析を行った。この研究で得られた知見から、疾患の重症度によりmiRNA発現パターンが変化することが疑われた。そこで、現在、疾患の重症度（罹患してからの経過時間）の違いによる疾患マウスモデルを作製し、NGS、qRT-PCR等を用いたmiRNAおよびmRNAの網羅的発現解析を進めている。

有多种疾病在伤口愈合过程中引起异常，作为病理之一，发病率随着年龄的增长而增加。但是，尚未确定对这些疾病的有效治疗，需要新的治疗方法。到目前为止，我们已经透露，在炎症阶段激活的中性粒细胞在糖尿病（DM）伤口中功能失调，导致延迟愈合，这表明原因是原因是MicroRNA-129-2-3P（miR-129）表达水平的可能性是生物过程障碍。我们还透露，恢复miR-129的表达水平具有改善愈合延迟的作用。先前的研究表明，microRNA（miRNA）的表达可以由圆形rna（circrna）调节。因此，在这项研究中，为了阐明miR-129表达控制的机制，使用微阵列进行了在DM衍生的中性粒细胞中特异性表达的CIRCRNA的全面表达分析。结果，使用QRT-PCR来确认在DM衍生的中性粒细胞中具有miR-129结合序列的两个位置的ciRCRNA表达显着增加。该ciRCRNA表现出与miR-129的反表达模式，表明在DM衍生的中性粒细胞中的miR-129表达可能受circrna调节。因此，下一个问题是研究控制circrna-mir-129表达的效果。同时，使用下一代测序（NGS）对疾病衍生的中性粒细胞特异性表达的全面表达分析是在DM以外的其他疾病中进行的，其中伤口愈合过程中的异常是病理。这项研究的结果表明，miRNA表达模式取决于疾病的严重程度。因此，我们目前正在创建疾病严重程度不同的疾病小鼠模型（由于疾病遭受了困扰），并使用NGS，QRT-PCR等对miRNA和mRNA表达进行了全面分析。