Understanding of the musculoskeletal system regulated by the transcription factor Scleraxis

了解转录因子 Scleraxis 调节的肌肉骨骼系统

• 批准号: 21H03107
• 负责人: 宿南 知佐
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03107/
• 关键词: 腱・靱帯; Scleraxis; エンハンサー; 遺伝子改変動物; enChIP; Sox9; enChIP法

Scx遺伝子の下流に同定した1.97 kbのenhancer領域を、さらに分割し、ゲノム領域をhsp68のminimal promoterとTol2配列を有するLacZ reporterベクターに組み込んたベクターを受精卵にmicroinjectionし、得られたTgマウス胚のLacZ活性をX-gal染色によって解析した。その結果、343 bpのゲノム断片にenhancer活性が検出され、哺乳類、鳥類、シーラカンスまで高度に保存されているモチーフが存在することを見出した。このゲノム領域をpGL4.23に組み込み、enhancer領域に結合する候補となる転写因子の発現ベクターと共に、HEK293T細胞、ATDC5細胞、腱細胞に導入し、Dual luciferase assayを行った。また、昨年度に引き続き、enChIPによる解析も進めている。系譜解析では、ScxCre/+:RosaTomatoマウスを用いた解析によって、２週齢の脛骨では、Scxの発現履歴がある細胞は、付着している腱や靱帯に限局しているが、６週齢になると、皮質骨や一次海綿骨の一部の骨芽細胞でも観察されることを見出している。免疫染色を行うと、それらの細胞では、Runx2の発現が検出された。ScxCreERT2;RosaTomatoマウスに、肋骨でのScxの発現が検出される胎生11.5日より後に4-ヒドロキシタモキシフェンを投与して、Tomatoの発現を観察したところ、肋骨でのCreの発現を回避することが出来ることが確認出来た。Sox9CreERT2;RosaTomatoマウスでの解析では、生後、Sox9の発現する細胞が骨格筋でも検出された。Sox9発現領域でScxを欠失するSox9Cre;Scxflox/floxマウスと野生型マウスの顎関節、腱の付着部、頭蓋の縫合部の形態・組織学的変化を解析している。

The lower levels of Scx were identified in enhancer domain, hsp68 domain, minimal promoter domain, hsp68 domain, and Tol2 domain. There was a list of tissue samples, such as zygotes, fertilized eggs, Tg embryos, embryo LacZ activity, X-gal staining, DNA analysis. The results showed that the enhancer activity of 343 bp fragments was significantly higher than that of mammals, mammals and mammals. In the field of pGL4.23, the combination of the enhancer field and the candidate gene writing factor shows that there are many common genes, HEK293T cells, ATDC5 cells, tendon cells, and Dual luciferase assay cells. The review, the introduction of the last year, and the analysis of enChIP were in progress. The system is used to analyze, ScxCre/+:RosaTomato, bone, Scx, tendon, bone, skin, bone, bone and bone. Immunostaining showed that the cells were positive, the cells were stained, and the cells were stained with Runx2. ScxCreERT2;RosaTomato

项目成果

【研究成果】iPS細胞から効率良く腱細胞を分化誘導する系を確立

[研究成果] 建立有效诱导iPS细胞分化肌腱细胞的系统

The mechanosensitive ion channel PIEZO1 is expressed in tendons and regulates physical performance

• DOI: 10.1126/scitranslmed.abj5557
• 发表时间: 2022-06-01
• 期刊: SCIENCE TRANSLATIONAL MEDICINE
• 影响因子: 17.1
• 作者: Nakamichi, Ryo;Ma, Shang;Asahara, Hiroshi
• 通讯作者: Asahara, Hiroshi

軟骨細胞

软骨细胞

• 发表时间: 2023
• 期刊: 最新の骨粗鬆症学(第2版)
• 作者: 内部健太;余 昕怡;山家新勢;宿南知佐
• 通讯作者: 宿南知佐

腱・靭帯分化誘導システムにおけるシングルセル解析

肌腱/韧带分化诱导系统中的单细胞分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 吉本 由紀;上住 聡芳;上住 円;田中 かおり;余 昕怡;黒澤 珠希;山家 新勢;前原 一満;大川 恭行;外丸 祐介;宿南 知佐
• 通讯作者: 宿南 知佐

TnmdCreノックインマウスの作製とTnmd陽性細胞の系譜解析

TnmdCre 敲入小鼠的产生及 Tnmd 阳性细胞的谱系分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 山家新勢;吉本由紀;樋口真之輔;味八木茂;宿南知佐
• 通讯作者: 宿南知佐