Mechanical regulation of the musculoskeletal system by tendons and ligaments

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Scx欠失ホモマウス、ヘテロマウスと野生型の２週齢のアキレス腱から抽出したRNAを用いて、RNAseqによるトランスクリプトーム解析を行っている。メカノセンシングに関連する遺伝子群に着目して解析を行っており、定期的に開催しているドイツ側とのZoomミーティングによって結果を議論している。ドイツ側では、ヒトの真皮由来の線維芽細胞を用いた3Dオルガノイドモデルを構築し、Dexamethasone(Dex)の効果などを検討した。Dexは腱分化の促進には有効ではなく、高濃度ではオルガノイド形成に負の作用を示したが、未処理あるいは低濃度のDex処理を行ったオルガノイドの腱関連遺伝子の発現プロファイルは腱由来の細胞によって形成されたオルガノイドとほぼ同等であることを見出している。前年度に引き続き、新規の伸展刺激応答性エレメントを同定するために、マウスScx遺伝子とTnmd遺伝子の上流と下流を含むゲノム領域を分割し、minimal promoterを有するpGL4.23ベクター、あるいは、promoter lessのpGL4.10ベクターに組み込んでDual luciferase assayを行っている。これまでに、ScxCre KI;RosaTomatoマウスの解析で、生後、Scxが骨組織でも発現することが見出されているので、ScxGFPレポーターマウスの非脱灰骨切片を用いた免疫染色によって、Scxが骨のどのような部位のどのような細胞で発現しているかを解析した。Scx欠失による下顎骨の形態変化と筋肉などの軟組織の関係を調べるために、野生型マウスの新生仔をルゴール液に浸漬後にマイクロCTで撮影し、得られた画像を用いて、Amiraによる立体構築を行うシステムを確立した。