Cnm陽性う蝕原因細菌のPRIPを介した脳出血増悪機序解明による健康寿命の延伸

本年度も昨年度に続き、in vivo研究では、すでに確立しているCnm陽性Sm歯髄感染 ラット脳出血モデルを、in vitroの研究では歯髄細胞と血管内皮細胞を用いて実験を行った。１．Cnm陽性Sm（WT株）とCnmノックアウトSm（KO株）を感染させたラットモデルマウスを用いた実験：WT株群の大脳における出血班数と拡張血管数は、KO株群と比較して増加していた。HE染色画像において、WT群では出血像が観察できた。さらに、Smの蛍光免疫染色によって、Smは血管内皮の裏打ちが崩壊した部位に沿って存在していた。WT群の血清中のIL-1β（脳出血に伴いその量が増加するサイトカイン）値は、KO群より高かった。２．細胞外基質に対するSmの付着実験：Ⅳ型コラーゲンに加えて、Ⅰ型コラーゲンとラミニンに対する付着については、WT株と比較し、KO株の各基質への付着率が減少していた。３．血管内皮細胞と歯髄細胞に対する付着実験：WT株と比較し、KO株の各細胞への付着率が減少していた。４．siRNAによってⅣ型コラーゲン発現をノックダウンした血管内皮細胞へのWT株の付着実験：Ⅳ型コラーゲン発現細胞と比較し、付着率が減少していた。５：臨床分離株を用いたⅣ型コラーゲンと血管内皮細胞への付着実験：Cnm陰性株と比べて、陽性株の付着率は高かった。６．疫学研究：本大学病院脳神経内科受診中の脳出血の既往のある患者と配偶者、合計57名からプラークを採取した。Sm検出は41名、41名の内、Cnm検出は13名であった。

本年度も昨年度に続き、in vivo研究では、すでに確立しているCnm陽性Sm歯髄感染 ラット脳出血モデルを、in vitroの研究では歯髄細胞と血管内皮細胞を用いて実験を行った。１．Cnm陽性Sm（WT株）とCnmノックアウトSm（KO株）を感染させたラットモデルマウスを用いた実験：WT株群の大脳における出血班数と拡張血管数は、KO株群と比較して増加していた。HE染色画像において、WT群では出血像が観察できた。さらに、Smの蛍光免疫染色によって、Smは血管内皮の裏打ちが崩壊した部位に沿って存在していた。WT群の血清中のIL-1β（脳出血に伴いその量が増加するサイトカイン）値は、KO群より高かった。２．細胞外基質に対するSmの付着実験：Ⅳ型コラーゲンに加えて、Ⅰ型コラーゲンとラミニンに対する付着については、WT株と比較し、KO株の各基質への付着率が減少していた。３．血管内皮細胞と歯髄細胞に対する付着実験：WT株と比較し、KO株の各細胞への付着率が減少していた。４．siRNAによってⅣ型コラーゲン発現をノックダウンした血管内皮細胞へのWT株の付着実験：Ⅳ型コラーゲン発現細胞と比較し、付着率が減少していた。５：臨床分離株を用いたⅣ型コラーゲンと血管内皮細胞への付着実験：Cnm陰性株と比べて、陽性株の付着率は高かった。６．疫学研究：本大学病院脳神経内科受診中の脳出血の既往のある患者と配偶者、合計57名からプラークを採取した。Sm検出は41名、41名の内、Cnm検出は13名であった。