遺伝子組換え型エナメルタンパク質を利用した象牙質再生に関する研究

近年,エナメルタンパク質は,エナメル質の石灰化を制御するばかりでなく,細胞の増殖や分化に関わることが示された。本年度はエナメルタンパク質の歯髄細胞の増殖や分化における役割を検討した。1.組み換え型ヒトタフテリンが歯髄細胞のアルカリホスプァターゼ(ALPase),オステオポンチン,BMP-2,BMP-4の遺伝子発現に及ぼす影響をRT-PCR法で調べた。組み換え型ヒトタフテリンは,各骨関連タンパク質の遺伝子発現に影響を及ぼさなかった。2.タフテリンがウサギ切歯歯髄細胞のオステオポンチン,BMP-2,BMP-4遺伝子発現に及ぼす影響を調べるため,ウサギ切歯上皮由来細胞から分離したタフテリンの遺伝子を,pcDNA3.1/His/LacZベクターを用いて,ウサギ歯髄由来線維芽細胞に導入した。48時間後に,遺伝子導入群と非導入群の各骨関連タンパク質の発現をRT-PCR法で調べたが,発現には変化が認められなかった。我々は,昨年度,ウサギ切歯上皮由来細胞とウサギ歯髄由来線維芽細胞の共培養系におて,上皮細胞に近接した線維芽細胞のALPase活性が増加することを明らかにした。このALPaseを増加させる因子としてタフテリンに注目した。しかし,得られた実験の結果から,タフテリンでなく,別の因子が線維芽細胞のALPaseの増加に関係していることが示唆された。また,分離したウサギのタフテリンの遺伝子配列から想定されるアミノ酸の配列とヒトおよびマウスのタフテリンのアミノ酸配列のホモロジーは,それぞれ,86%および84%であった。

近年,エナメルタンパク質は,エナメル質の石灰化を制御するばかりでなく,細胞の増殖や分化に関わることが示された。本年度はエナメルタンパク質の歯髄細胞の増殖や分化における役割を検討した。1.組み換え型ヒトタフテリンが歯髄細胞のアルカリホスプァターゼ(ALPase),オステオポンチン,BMP-2,BMP-4の遺伝子発現に及ぼす影響をRT-PCR法で調べた。組み換え型ヒトタフテリンは,各骨関連タンパク質の遺伝子発現に影響を及ぼさなかった。2.タフテリンがウサギ切歯歯髄細胞のオステオポンチン,BMP-2,BMP-4遺伝子発現に及ぼす影響を調べるため,ウサギ切歯上皮由来細胞から分離したタフテリンの遺伝子を,pcDNA3.1/His/LacZベクターを用いて,ウサギ歯髄由来線維芽細胞に導入した。48時間後に,遺伝子導入群と非導入群の各骨関連タンパク質の発現をRT-PCR法で調べたが,発現には変化が認められなかった。我々は,昨年度,ウサギ切歯上皮由来細胞とウサギ歯髄由来線維芽細胞の共培養系におて,上皮細胞に近接した線維芽細胞のALPase活性が増加することを明らかにした。このALPaseを増加させる因子としてタフテリンに注目した。しかし,得られた実験の結果から,タフテリンでなく,別の因子が線維芽細胞のALPaseの増加に関係していることが示唆された。また,分離したウサギのタフテリンの遺伝子配列から想定されるアミノ酸の配列とヒトおよびマウスのタフテリンのアミノ酸配列のホモロジーは,それぞれ,86%および84%であった。