Elucidation of cellular factors for pandemic based on the enzymatic properties of pandemic influenza virus

基于大流行性流感病毒的酶学特性阐明大流行的细胞因素

• 批准号: 21H03183
• 负责人: 高橋 忠伸
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03183/
• 关键词: シアリダーゼ; ノイラミニダーゼ; インフルエンザウイルス; 蛍光イメージング; 増殖; 酵素; 流行

ヒトのA型インフルエンザウイルスは数十年に一度、新型（新抗原性）インフルエンザによる世界大流行（パンデミック）を起こす。インフルエンザウイルスの表面酵素ノイラミニダーゼ（NA）の酵素性状の一つである酸性安定性は、季節性ウイルスではほぼ見られず、過去のパンデミックを起こしたすべてのウイルスに見られる特有の酵素性状である。この酵素性状は培養細胞レベルでウイルス増殖を促進させることから、当時のパンデミック発生に貢献する一要因の可能性が考えられた。本研究では、NAの酸性安定性に基づく細胞レベルのウイルス増殖促進機構を解析し、パンデミック発生に貢献する宿主細胞側の要因を解明する。この細胞レベルの機構を自然界のパンデミックウイルスで確認し、NAの酸性安定性やこの酵素性状を介した機構がパンデミックの一要因である可能性を検証する。NAの酵素性状やこの性状を介した機構は、パンデミックを予測する指標に利用できるものと期待される。ウイルス細胞侵入過程のNAのみにおける細胞への影響を解析するため、前年度に引き続きNAのタンパク質発現・精製系の確立をめざした。バキュロウイルス-タンパク質発現システムを利用して、1968年にパンデミックを起こしたホンコンインフルエンザウイルス株のN2型NA四量体の分泌型タンパク質の大量発現系を確立した。これにエンドサイトーシスシグナルを付加したところ、精製後の収量が大きく減少した。NA発現時にヘパリンを添加したが、収量の改善は見られなかった。その他、細胞内のNAのシアリダーゼ活性をイメージングするための蛍光剤の開発や方法の検討を行った。既報の蛍光剤を利用して、固定化した感染細胞内のゴルジ装置に局在したNAのシアリダーゼ活性を蛍光イメージングする手法を確立した。さらに、既報の蛍光剤の性能を向上させた新規蛍光剤の候補が探索できた。

ヒ ト の type A イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス は decades に once, new antigenic (new) イ ン フ ル エ ン ザ に よ る world pandemic (パ ン デ ミ ッ ク) を up こ す. イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス の surface enzyme ノ イ ラ ミ ニ ダ ー ゼ (NA) の enzyme properties の つ で あ る acid stability は, seasonal ウ イ ル ス で は ほ ぼ see ら れ ず, past の パ ン デ ミ ッ ク を up こ し た す べ て の ウ イ ル ス に see ら れ る の enzyme unique traits で あ る. こ の enzyme properties は culture cell レ ベ ル で ウ イ ル ス raised colonization を promote さ せ る こ と か ら, then の パ ン デ ミ ッ ク 発 raw に contribution す る a possibility in の が exam え ら れ た. This study で は, NA の acid stability に base づ く cells レ ベ ル の ウ イ ル ス raised yield promotion agencies を analytical し, パ ン デ ミ ッ ク 発 raw に contribution す る の will rejoice in the host cell side を interpret す る. こ の cells レ ベ ル の institutions を nature の パ ン デ ミ ッ ク ウ イ ル ス で confirm し, NA の acid stability や こ の enzyme properties を interface し た institutions が パ ン デ ミ ッ ク の one by で あ る possibility を 検 card す る. NA の enzyme properties や こ の traits を interface し た は, パ ン デ ミ ッ ク を be す る index に using で き る も の と expect さ れ る. ウ イ ル ス cells invade の NA の み に お け る cells へ の effect を resolution す る た め, before the annual に き 続 き NA の タ ン パ ク qualitative 発 now, refined is の establish を め ざ し た. バ キ ュ ロ ウ イ ル ス - タ ン パ ク qualitative 発 now シ ス テ ム を using し て, 1968 に パ ン デ ミ ッ ク を up こ し た ホ ン コ ン イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス NA の N2 (four quantity body type の secretion タ ン パ ク を の large 発 now department to establish quality し た. こ れ に エ ン ド サ イ ト ー シ ス シ グ ナ ル を plus し た と こ ろ, refined after の quantities 収 が き く reduce し た. The current occurrence of NA is にヘパリ られな を を. The addition of <s:1> たが and the improvement of the amount are を. See られな った った. そ の him, intracellular の NA の シ ア リ ダ ー ゼ active を イ メ ー ジ ン グ す る た め の 蛍 light tonic の open 発 や method の 検 line for を っ た. Both reported の 蛍 tonic を use light し て, immobilized し た within infected cells の ゴ ル ジ device に bureau in し た NA の シ ア リ ダ ー ゼ active を 蛍 light イ メ ー ジ ン グ す る gimmick を establish し た. Youdaoplaceholder0, it is reported that the <s:1> 蛍 optical agent <s:1> performance を is upward させた new regulation 蛍 optical agent <e:1> candidate が exploration で た た た た.

项目成果

認知症リスク因子の脳内蓄積に対する生活習慣病の影響と予防法の構築

生活方式相关疾病对脑部痴呆危险因素累积的影响及预防方法的开发

• 发表时间: 2022
• 作者: 中尾 初音;南 彰;藤田 耕成;荻野 加奈子;平林 義雄;紅林 佑希;高橋 忠伸;竹内 英之
• 通讯作者: 竹内 英之

線条体に高い発現を示すシアリダーゼアイソザイムNEU2の ドパミン作動 性神経における機能解析

多巴胺能神经纹状体中高表达的唾液酸酶同工酶 NEU2 的功能分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 籏 祥太;南 彰;井内 彩乃;紅林 佑希;高橋 忠伸;鈴木 隆;竹内 英之
• 通讯作者: 竹内 英之

ノロウイルスに結合性を示す糖脂質の探索とウイルス感染における機能解析

寻找与诺如病毒结合的糖脂以及病毒感染中的功能分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 塚本文汰;紅林佑希;安部友凉;若林佳輝;南 彰;高橋忠伸;鈴木 隆;竹内英之
• 通讯作者: 竹内英之

インフルエンザウイルス特異的シアリダーゼ蛍光イメージング剤の開発

流感病毒特异性唾液酸酶荧光显像剂的研制

• 发表时间: 2022
• 作者: 成道 豊;高橋忠伸;紅林佑希;大坪忠宗;池田 潔;南 彰;竹内英之
• 通讯作者: 竹内英之

Improvement of cognitive function by food materials based on glyco-science

基于糖科学的食品原料改善认知功能

• 发表时间: 2021
• 作者: Kosei Fujita;Akira Minami;Yuki Abe;Hatsune Nakao;Yuuki Kurebayashi;Tadanobu Takahashi;Takashi Suzuki;Hideyuki Takeuchi
• 通讯作者: Hideyuki Takeuchi