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弱毒生インフルエンザワクチンの国産開発に資する低温増殖型組換えウイルスの性状解析

低温繁殖重组病毒的表征有助于国内减毒流感疫苗的开发

基本信息

批准号：
21H03188
负责人：
内藤忠相
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Kawasaki Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに研究代表者は、A型インフルエンザウイルス実験室株の1つであるPR8株（A/Puerto Rico/8/34）を用いて、ポリメラーゼサブユニットの1つであるPB1蛋白質の471番目のLys残基をHis残基に置換した単一アミノ酸変異株（PR8-PB1-K471H変異株）が、健常者体温である36℃から37℃の温度条件下では増殖できない低温増殖馴化性を獲得することを明らかにした。そこで、低温増殖馴化型PR8-PB1-K471H変異株が新規弱毒生ワクチンとして機能するかどうかを調べるため、PB1-K471H株をマウスに経鼻接種した後、4週間後に致死量の野生型PR8株を接種するチャレンジ感染実験を行った。その結果、ワクチン株未接種のマウス群は感染6日後までに全てのマウスが死亡したが、PB1-K471H株を予め接種したマウス群では全てのマウスが生存した。PR8株に既存の弱毒生インフルエンザワクチンFluMistのウイルス性状を付与した組換えFluMist型PR8株を用いたワクチン有効性の評価解析から、PB1-K471H株はFluMistと同等の感染予防効果を持つことを明らかにした。さらにPB1-K471H株の特性として、PB1-K471H株は野生型PR8株と同程度の子孫粒子数を産生するが、その粒子集団において「増殖性が著しく低下したウイルス粒子」の存在割合が非常に高いことを明らかにした。動物培養細胞にPB1-K471H株と野生型PR8株を共感染させる実験の結果、PB1-K471H株は野生型PR8株の子孫粒子産生を阻害する「ウイルス干渉効果」を示した。このようなPB1-K471H株のウイルス性状は、低温増殖馴化性に加えて安全性の高い弱毒生ワクチン開発に活用できる有用な特性であると考え、今後は動物感染実験等によりワクチン安全性試験を行う予定である。

The representative of this study is the type A strain of PR8 strain.(A/Puerto Rico/8/34) The substitution of Lys residues at 471 positions in PB1 protein for His residues in the protein was carried out in a single acid variant.(PR8-PB1-K471H variant), healthy person temperature is between 36℃ and 37 ℃, the temperature of reproduction is between 36℃ and 37℃, the temperature of reproduction is between 36℃ and 37℃, the temperature of reproduction is between 36℃ and 37 ℃, the temperature of reproduction is between 37 ℃ and 37 ℃, the temperature of reproduction is between 37 ℃ and 37 ℃, the temperature of reproduction is between 36 ℃ and 37 ℃, the temperature of reproduction is between 37 ℃ and 37 ℃, the temperature of reproduction is between 37 ℃ and 37 ℃, the temperature of reproduction is between 37 ℃ and 37 ℃. After 4 weeks of inoculation, the lethal dose of wild-type PR8 strain was increased. After 6 days of infection, PB1-K471H strain was inoculated into the uninoculated group. PR8 strain has been identified as an attenuated strain, and PB1-K471H strain has been identified as a flumist-resistant strain. The characteristics of PB1-K471H strain are as follows: PB1-K471H strain has the same number of progeny as wild-type PR8 strain, and the number of progeny is as high as that of wild-type PR8 strain. The results of co-infection of PB1-K471H strain with wild-type PR8 strain in animal culture cells and the inhibition of particle production by PB1-K471H strain with wild-type PR8 strain are shown. The PB1-K471H strain is characterized by low temperature growth and domestication, high safety, low toxicity, development and utilization, useful characteristics, and future animal infection.