ラマン散乱光解析を用いた悪性リンパ腫と加齢性変化の鑑別

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２０２１年度は留学による研究中断のため、２０２１年４月１日より、中断した４月２０日までの研究について実績を記載する。２０２０年度に作成したin vitroドルーゼンモデルにおける、ApoEの発現の、定量的な評価を行った。具体的には、トランスウェル上に３か月培養した網膜色素上皮を１０ウェル使用した。なお、この１０ウェルは同時に培養を開始し維持した。５ウェルにヒト血清を１週間添加し、残り５ウェルには添加せずにSerum Freeのまま維持した。同日に１０ウェルを４%PFAにて固定し、ApoE抗体およびアレクサ４８８二次抗体を用いて免疫細胞染色を施行した。なお、血清添加群、非添加群ともに、１ウェルのみ一次抗体を用いないネガティブコントロールをおいた。BZ-x700にて20倍の対物レンズを用いて抗体の発現範囲を評価すべく撮影した。撮影においては、撮影部位は画一的に、ウェルの中心において３×３のタイリングモードを使用した。撮影された写真は、画像解析ソフトFijiにて解析を行った。免疫染色陽性であった部位が画像全体に占める割合を評価した。一次抗体を用いないネガティブコントロールにおいては、血清の添加・非添加に関わらず、陽性の面積は０．００１％であった。ヒト血清を添加しない４ウェルでは平均０．０９％（標準偏差０．０５）で免疫染色が陽性であった。これに対し、ヒト血清を添加した４ウェルでは平均０．７９％（標準偏差０．４４）にて免疫染色が陽性となった。両群の平均値の差をt検定にて検定したところ、統計的に有意な差がみられた（p<0.05)。これにより、今回用いたin vitroのモデルでは、ドルーゼンの構成成分であるApoEの発現が亢進していることが定量的に確認された。