正確な生体内ゲノム編集評価システムの開発

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汎用性、安全性の高い高効率なゲノム編集ツールは、様々なライフサイエンス分野の基礎研究・応用研究両面に必要不可欠な技術である。国産ゲノム編集技術として開発したCRISPR-Cas3を社会実装できるゲノム編集ツールとして確立するためには、安全性や効率などを正確に評価する必要があるが、CRISPR-Cas3の標的特異性を正確に評価できる解析手法は確立されていない。本課題研究では、スイス連邦工科大学のJacob Corn教授らと共に、CRISPR-Cas3の生体内ゲノム編集における正確な評価システムの開発を目指している。本年度は、2020年から2021年にスイス連邦工科大学に滞在してDNA修復関連因子Mre11の抗体を用いたChip-seq法をCRISPR-Cas3用に改良したものをさらに検証し、オフターゲット候補領域を検出する方法をDISC 3-seqとして確立した。実際にin silico解析で複数のオンターゲットを持つ標的、オフターゲット候補領域の多い標的を敢えて選択することで、DISC 3-seqでこれらのオフターゲットを評価できるか検証した。その結果、いくつかの候補領域で検出が確認され、数値化することに成功した。現在、DISC 3-seqで検出された領域について変異導入効率を詳細に検討し、変異導入効率の相関がみられるかどうかを評価している。