正確な生体内ゲノム編集評価システムの開発

精准体内基因组编辑评估系统开发

• 批准号: 19KK0401
• 负责人: 吉見 一人
• 金额: $ 9.73万
• 依托单位: The University of Tokyo (2020-2022)Osaka University (2019)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (A))
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020 至 2023
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19KK0401/
• 关键词: CRISPR-Cas3; オフターゲット解析; 標的特異性; ゲノム編集; オフターゲット

汎用性、安全性の高い高効率なゲノム編集ツールは、様々なライフサイエンス分野の基礎研究・応用研究両面に必要不可欠な技術である。国産ゲノム編集技術として開発したCRISPR-Cas3を社会実装できるゲノム編集ツールとして確立するためには、安全性や効率などを正確に評価する必要があるが、CRISPR-Cas3の標的特異性を正確に評価できる解析手法は確立されていない。本課題研究では、スイス連邦工科大学のJacob Corn教授らと共に、CRISPR-Cas3の生体内ゲノム編集における正確な評価システムの開発を目指している。本年度は、2020年から2021年にスイス連邦工科大学に滞在してDNA修復関連因子Mre11の抗体を用いたChip-seq法をCRISPR-Cas3用に改良したものをさらに検証し、オフターゲット候補領域を検出する方法をDISC 3-seqとして確立した。実際にin silico解析で複数のオンターゲットを持つ標的、オフターゲット候補領域の多い標的を敢えて選択することで、DISC 3-seqでこれらのオフターゲットを評価できるか検証した。その結果、いくつかの候補領域で検出が確認され、数値化することに成功した。現在、DISC 3-seqで検出された領域について変異導入効率を詳細に検討し、変異導入効率の相関がみられるかどうかを評価している。

High efficiency of versatility and safety, compilation of basic research and application research, and necessary technologies. CRISPR-Cas3 has been developed in China, and its compilation techniques have been established in China. The analytical methods for CRISPR-Cas3 have been established in China. This project aims to provide guidance for the development of CRISPR-Cas3 in vivo. This year, from 2020 to 2021, the United States University of Technology has established a method for detecting DNA repair related factors by using the Chip-Seq method. In fact, in silico analysis, the number of candidate fields is selected, and DISC 3-seq is evaluated. The result, the candidate field, the detection, the confirmation, the numerical value, the success. Now, DISC 3-seq can detect different import efficiency in different fields.

项目成果

Development and applications of CRISPR-Cas3 technology for studying human diseases

CRISPR-Cas3技术在人类疾病研究中的开发与应用

• 发表时间: 2021
• 作者: Joe Sakamoto;Eriko Chisada;Pham Van Cuong;Masahiro Nakano;Takeharu Nagai;Hayato Yokoi;Takeshi Kitano;Yasuhiro Kamei;吉見一人
• 通讯作者: 吉見一人

国産ゲノム編集技術の開発と新型コロナウイルス診断への応用

国产基因组编辑技术开发及其在新型冠状病毒诊断中的应用

• 发表时间: 2020
• 作者: Joe Sakamoto;Yuko Kamikawa;Yasuhiro Kamei;吉見一人
• 通讯作者: 吉見一人

Ｃａｓ３タンパク質を製造する方法

Cas3蛋白的生产方法

• 发表时间: 2021

タイプI-E CRISPR-Cas3による標的二本鎖DNA切断機構の解明

I-E型CRISPR-Cas3阐明靶标双链DNA切割机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 吉見 一人;竹下 浩平;古寺 哲幸;渋村 里美;山内 祐子;山本 雅貴;真下知士
• 通讯作者: 真下知士

CRISPR-Cas3システムによるゲノム編集－国産ゲノム編集技術の再生医療への挑戦

使用CRISPR-Cas3系统进行基因组编辑——国产基因组编辑技术对再生医学的挑战

• 发表时间: 2023
• 期刊: 実験医学 増刊 再生医療2023
• 作者: 渡辺祥司;吉見一人;真下知士
• 通讯作者: 真下知士