ゲノム・細胞情報に基づく国内希少動物の繁殖促進戦略

基于基因组和细胞信息的国产珍稀动物育种促进策略

• 批准号: 20H00420
• 负责人: 村山 美穂
• 金额: $ 29.12万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00420/
• 关键词: 絶滅危惧種; ゲノム; iPS細胞; 生殖細胞; 加齢

本研究では、国内の希少高次捕食者のツシマヤマネコ、ニホンイヌワシにおいて、繁殖の成否に関わる要因を司る分子基盤を、ゲノム、細胞、生殖機能など多階層縦断的な解析によって明らかにする。具体的には1）繁殖機能に関わる遺伝子の同定、2）iPS細胞および始原生殖細胞の作製法の確立、3）加齢やストレスによる繁殖機能低下の原因解明、を相互補完的に実施し、得られる情報に基づいて、飼育施設に有効な繁殖促進戦略を提案する。1）では、整備したイヌワシのゲノム情報を基に、繁殖に関連する42遺伝子の配列を同定した。繁殖成績との比較から、MAN2C1、PDIA3、ZP2遺伝子が繁殖成績と関連する可能性が示唆された。ツシマヤマネコでも繁殖に関連する遺伝子の解析を進めた。2）では、昨年度に引き続き、ニホンイヌワシiPS細胞の培養条件の検討を行い、ヒト多能性幹細胞用の未分化維持用合成培養液が使用できることを確認した。始原生殖細胞分化への条件検討も試みた。作成したiPS細胞の機能評価のため、長期培養後における増殖能・分化能・核型解析を行った。ケナガネズミの初代培養細胞へ変異型CDK4, サイクリンD1, テロメア逆転写酵素(TERT)を導入することで無限に分裂細胞の作製に成功した。ケナガネズミでは、従来汎用されているウィルス由来の癌遺伝子SV40を用いた方法と比較して、染色体不安定性が発生せず、さらに二倍体を保持したまま無限分裂するという特徴を明らかにした。3）では、引き続き年齢推定の精度の向上を目指した。前年度と同様に糞を用いてストレスのバイオマーカーのコルチゾール濃度変化を調べると共に、簡易および迅速アッセイ法の開発に取り組んだ。生殖細胞では、ツシマヤマネコの死亡個体から摘出した精巣組織から精子を回収してフリーズドライ保存を実施した。フリーズドライ精子でも核形成可能な受精能を確認した。

This study で は, domestic の scarce higher predators の ツ シ マ ヤ マ ネ コ, ニ ホ ン イ ヌ ワ シ に お い て, reproduction の into no に masato わ る by を る molecular base plate を, ゲ ノ ム, cells, reproductive function な ど class more 縦 break な parsing に よ っ て Ming ら か に す る. Specific に は 1) reproductive function に masato わ る posthumous son 伝 の with iPS cells, 2) お よ び の の primordial germ cells in the beginning as know-how for the establishment, 3) add 齢 や ス ト レ ス に よ る の reasons for low reproductive function uttered, finish を mutual complement of に be し, too ら れ る intelligence に base づ い て, rearing facilities に have sharper な facilitating 戦 slightly を proposal す る. 1) で は, servicing し た イ ヌ ワ シ の ゲ ノ ム intelligence を に, breeding に masato even す る 42 heritage 伝 の match sequence を with fixed し た. The reproductive performance と the comparison of the 伝 offspring of ら, MAN2C1, PDIA3, and ZP2 が the reproductive performance と is related to the する possibility が indicates された. Youdaoplaceholder0 シ ヤ ネコで ネコで に breeding に related する offspring 伝 <s:1> analysis を into めた. 2) で は, yesterday's annual に き 続 き, ニ ホ ン イ ヌ ワ シ の iPS cell culture conditions の beg を 検 い, ヒ ト pluripotent stem cells with の undifferentiated maintain with synthetic culture が use で き る こ と を confirm し た. The conditions for the differentiation of primordial germ cells へ <s:1> 検 検 for screening みた. The <s:1> function evaluation of た たiPS cells 価 ため ため after long-term culture における proliferative capacity, differentiation capacity and karyotype analysis を row った. ケ ナ ガ ネ ズ ミ の original culture cell へ - different CDK4, サ イ ク リ ン D1, テ ロ メ ア inverse planning write enzyme (TERT) を import す る こ と で infinite に splinter cell の cropping に successful し た. ケ ナ ガ ネ ズ ミ で は, 従 to domestic さ れ て い る ウ ィ ル ス origin の carcinoma heritage 伝 son SV40 を with い た と comparative し て, chromosome labile が 発 raw せ ず, さ ら に diploid を keep し た ま ま to divide す る と い う, 徴 を Ming ら か に し た. 3) で で, by drawing the 齢 続 齢 year 齢, it is estimated that the <s:1> accuracy <e:1> is determined by pointing upwards to the を eye to the た. With others before annual と に dung を with い て ス ト レ ス の バ イ オ マ ー カ ー の コ ル チ ゾ ー ル concentration variations change を adjustable べ る と に, simple お よ び quickly ア ッ セ イ method の open 発 に group take り ん だ. Germ cell で は, ツ シ マ ヤ マ ネ コ の death individual か ら pick the し た fine 巣 organization か ら sperm を back 収 し て フ リ ー ズ ド ラ イ save を be applied し た. Youdaoplaceholder0 フリ ズドラ ズドラ sperm で フリ nuclear formation may な fertilization energy を confirm た た.

项目成果

Demographic history of the Malayan tapir: A whole-genome resequencing approach

马来貘的人口统计史：全基因组重测序方法

• 发表时间: 2021
• 作者: QL Lim;M Murayama
• 通讯作者: M Murayama

Do macho horses have all the mojo? Examining testosterone concentrations in feral stallions

男子气概的马拥有所有的魔力吗？

• 发表时间: 2020
• 作者: Pinto P;Mendonca R;Ringhofer M;Kinoshita K;Hirata S
• 通讯作者: Hirata S

野生ボルネオ・オランウータン（Pongo pygmaeus morio）の雌の妊娠と一斉結実との関係ー15年間の記録－

野生婆罗洲猩猩 (Pongo pygmaeus morio) 雌性怀孕与同时结果的关系 - 15 年记录 -

• 发表时间: 2021
• 作者: Tsuchiya Ryohei;Saotome Mika;Kinoshita Chiaki;Kamoi Kazuki;Kagawa Wataru;阿部 竜;久世濃子，金森朝子，山崎彩夏，田島知之，蔦谷匠，Renata Mendonca， Henry Bernard，木下こづえ
• 通讯作者: 久世濃子，金森朝子，山崎彩夏，田島知之，蔦谷匠，Renata Mendonca， Henry Bernard，木下こづえ

Getting basic information of wild animals through genetic approaches

通过遗传手段获取野生动物的基本信息

• 发表时间: 2021
• 作者: 稲波修 ;安井博宣;Miho Murayama
• 通讯作者: Miho Murayama

絶滅危惧種アマミノクロウサギ由来の無限分裂細胞及び体細胞クローンの作製

濒临灭绝的奄美兔无限分裂细胞和体细胞克隆的生产

• 发表时间: 2021
• 作者: 福田智一;折本愛;片山雅史;谷哲弥;伊藤圭子;永塚貴弘;仲川清隆;村山美穂;大沼学;清野透
• 通讯作者: 清野透